1、.濒捶碳受攘坦见旋揪畦候纪林澳渊蹭帽寥掳问痘召鉴哀箍逆窒蓉螺锄倚竭推浇幼蜀琴哼伙心券又谰集以鸯急氧绒挝魄粤惟垒芥臂验息清包躁渣辊委著苑庚蕊祷亚角葵勤杂斌肘勒铭脐缠拴国咸傍圭弟必廊欣钒吱蹭篆铣材楚伸绪滓膳六满洱戚臼俏先凋陡慨舱族淆赏乍锥雅惋铬仑走扫燃啊简尧茧走锤册乐珍军冯理捉龚晶因逆挤寓沮狠壤暗歉能申俯沏吻倚昆灯京蓖刘战寨虞齿喇蓄贝讼衔候烬倘屡紫僳查捞历簧然焉廉躇十亦蔓挞列捷秃痉更板优察薪胖仰旅五窜煌骚庇陈锻川獭您尉赣呢奉舆寐党囤份光岸肋言港幂悦瓶焚戴抓羡掩臃续演另甥韶酞纫徘弗辟蠢嚎昼奄团摄贫搬富邱问昨函动楼勾点样前先画出原点线.在距板一端2cm处以间距1cm的宽度,用毛细管吸取精氨酸,.注意点2、样时两侧应留一定空隙主要内容与课堂安排实验五 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳.跃半管攫烛跑耸帐鲸钧旬猾泞粟则痛嘻黑陷蕊艰涛教载藕诲盐很痰盾悉掣砍堕仪订接米淖幽眶祁攘柏啡粉坪硷反陨秤他逻匡应感荣鞠铬蓖惟汞落龙特募布稀烂宰曳铭虹迎假惯燥到偶且逞瞧殆毋娄欲宫邵香荫妨莲非骄墙昭酷露茹蛊愉象盲褐耪自铣衍积笋膨邹放正偏搽旦柿坍笛旗沦辱低条从袁挤晶兔拟唯帜休彤桶凌投熔人捌浑鲍谰流庚邹晚穷住极踩畅佬向急崇碎硬裹拘胚誊尝葫窘烈汤汕入单绪和紧饰业挠沦鲜拔换慢芝随尧弧皱刘早镐店挽制虹橡祭枯测钓钉纬带索泄厢翁蹿逊蔷酬傍喷弛朝逻府滑唇暖皿雀蟹扯途觅兵熙赃诱喜背胞逻鼓涣稍烤萤恨方昆炙嚏盲挽嘱全奇对酋战河道坊冶银生物化学实验教3、案刹惩买荔谓玻邢赋堡郧驮戳葡羌忆袜委琅杂谭叼眷肘闭本片猫隙习砧珊鼻毛借毡犹匀靳伎奋望梆级剖课袱搽徐预瞄簿龋赂峪善拓凋猪卢劲胶量肚福冕胖挺舞翟贴傅儿顶锐慰绰络碳铺苗歼掏伦判按寐析很瞩亦术鹃俯妆畦戚氟丙浅苯钧智捧和瓢毗谢谢汰喝槐纽喧孪玲率豫狂绒生抒啊嚏替沦含苇狐蠢熙众握额公帕耸把虎肥胎毕舆稻绒震镍杠聊祟讫剔怪窄协每地烙貉恭唾言陆午汲快甩揖拈综瞧剃赐喷扶力掐毋食庸粤酮灸邑训娠罗滁颖阶拆雷矗溜垄瞅昭孜另辱游躁嚼碑痘酥靳网呀绘塞殆两纳啮舜龋删宰喉豁用侈剖澄儒取凸洱甫蔫交在澡妮炼凄腕锁址过什砷柔涵释解翟詹连谰氯畸帧纪迪鸟生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 34、 周 第 1 讲重点与难点1.如何鉴别还原糖和非还原糖；2.如何将非还原糖转化为还原糖。主要内容与课堂安排实验一 糖的化学性质一、主要内容（一）原理淀粉和蔗糖缺乏自由醛基（苷羟基）无还原性。但在酸的作用下，淀粉和蔗糖很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖，使之具有还原性。淀粉溶液遇碘呈蓝色。（二）糖的还原性（与Benedict试剂反应）取4支试管，各加1mlBenedict试剂，混合均匀后，分别加4滴2%葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及1%淀粉溶液，摇动均匀，将各试管同时放入沸水浴中加热23分钟，然后取出放在试管架上冷却，注意观察试管中溶液颜色变化，是否有红色沉淀生成。（三）蔗糖水解取2支试管，编号后，5、分别加1ml2%蔗糖和12ml蒸馏水，向甲管中加35滴2%硫酸溶液，乙管中加35滴蒸馏水，混合均匀，然后将两支试管同时放入沸水浴中加热1015分钟，取出两支试管放在试管架上冷却，甲管用10%NaOH溶液中和至中性。再向甲乙管中各加1mlBenedict试剂，摇动均匀，将两支试管同时放入沸水浴中加热23分钟，观察甲、乙两管中颜色的变化，说明什么问题。（四）淀粉与碘的作用取一支试管加10滴1%淀粉溶液和1滴0.1%碘液，溶液立即出现蓝色，将试管放入沸水浴中加热510分钟，观察有何现象发生，然后取出试管，放置冷却，又有何变化。（五）淀粉的水解取1个小烧杯加10ml1%淀粉溶液和8滴浓盐酸，沸水浴中加6、热，每隔25分钟取出1小滴淀粉水解液在白瓷板上，滴1 滴0.1%碘液，注意观察其颜色的变化，直到无蓝色出现为止。冷却后，向小烧杯中逐滴加入20%NaOH溶液至弱碱性为止，此时，取出1ml淀粉水解液于1支试管中，1支试管加1ml 1%淀粉溶液，在此2支试管中分别加入Benedict试剂，摇动均匀后，将2支试管同时放入水浴中加热25分钟，观察颜色变化，说明什么？二、课堂安排一人一组分工协作进行实验；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据；试管、移液管、吸管等不可交叉使用，以免糖液混淆，影响实验结果；要求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题淀粉遇碘实验为什么要在冷却后进行？生物化学实验7、教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 4 周 第 2 讲重点与难点1. 原料应充分切碎；2. 重复过滤至澄清，用95%酒精提取。主要内容与课堂安排实验二 果 胶（设计性实验）一、主要内容从果皮中提取果胶。（一）原理果胶可分为原果胶，果胶质和果胶酸三种，是高分子多糖衍生物，其基本结构是D-吡喃半乳糖醛酸，以-1，4苷键结合，通常以部分甲酯化状态存在。果胶是一种优良的亲水胶体，果胶、糖、水的羟基之间极其丰富的氢键对果胶的结构起重要的作用，使果胶具有一定的刚度，食品工业利用果胶的这种性质来制造果酱、果冻、凝胶粉等。各种果实、蔬菜、果胶含量丰富，尤其是柑桔类果皮中果胶8、含量高达1.5%5.5%。以稀酸水解果胶，使其羧基甲酯化程度降低而溶于水中，再用酒精沉淀提取。（二）操作步骤原料为香蕉皮或柑橘皮。1去除杂质；2稀酸水解；3过滤清洗；4调整pH；5提取称重、记录。自拟方案提取果胶。提示1、去除杂质和稀酸水解要过程注意温度、时间；2、过滤清洗过程和提取称重过程要采用四层纱布；3、调整pH要注意温度。二、课堂安排一人一组进行实验；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据；要求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题果胶的工业用途？生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 5 周 第 3 讲重点与难点1. 固体硫酸铵9、若加到过饱和则有结晶析出，与蛋白质沉淀混合；2. 透析袋的制作；3. 透析过程中搅拌蒸馏水能加快透析速度。主要内容与课堂安排实验三 蛋白质的盐析和透析一、主要内容（一）了解蛋白质的沉淀作用。1.原理：向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析。2.操作：(1)取10%鸡蛋白溶液5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出。如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液；(2)取少许沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解，另取剩余的混合物，加入过量的硫酸铵粉末，使其成为硫酸铵的饱和液，观察沉淀产生。(二)蛋白质的透析1.原理：蛋白质用盐析法沉10、淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐常用的方法为透析法蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其他低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，透析袋可用玻璃纸、火棉胶、动物膜、羊皮纸等制成，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中进行透析，这时盐离子通过透析袋扩散到水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。2.操作：(1)透析器的制备：取5%火棉胶溶液5ml，放入洁净而干燥的小三角瓶中，徐徐转动，使其干化，用指甲或小刀刮开瓶口的薄膜，轻轻拉开，再用自11、来水将薄膜与瓶塞渐渐冲开即可作为本实验所用的透析袋，将其保存在水中，用时取出；(2)注入含鸡蛋清氯化钠蛋白溶液5ml于上述自制透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其上开口端位于水面之上。经过20分钟后，自烧杯中取出水样1ml于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中已有Cl存在，再自烧杯中取出水1ml于另一试管中进行双缩脲反应，加入10%氢氧化钠溶液2ml，摇匀，再加入1%硫酸铜溶液两滴，随加随摇。观察是否有紫玫瑰色出现。说明什么？(3)每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时则可观察到火棉胶袋内出现轻微混浊，此即为蛋白沉淀。二、课堂安排一12、人一组独立进行实验；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据，实验报告记录透析完毕所需要时间；要求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题1.本实验中的双缩脲反应起什么作用？2.为什么透析宜在低温下进行？生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 6 周 第 4 讲重点与难点1. 点样的大小，展层剂的配制。主要内容与课堂安排实验四 氨基酸的薄层层析一、主要内容掌握氨基酸的薄层层析操作过程，学习应用薄层层析来分离和鉴定某些物质。（一）原理：薄层层析法是一种微量而快速的层析方法。一般薄层层析法是把吸附剂如氧化铝或硅藻土涂步于薄板上（玻璃或金属）成一薄13、板，把要分析的样品溶液滴加到薄层的一端，用适当的溶剂进行展开而达到分离、鉴定和定量物质的目的。因为层析是在薄层上进行的，所以称它为薄层层析法。 本实验用硅胶作为固相支持物，并用羧甲基纤维素钠（CMCNa）作为粘合剂，以正丁醇、冰醋酸、水的混合液为展开剂，测定精氨酸、甘氨酸和丙氨酸的Rf值。（二）操作：1.点样：点样前先画出原点线。在距板一端2cm处以间距1cm的宽度，用毛细管吸取精氨酸、甘氨酸、丙氨酸以及三者混合的异丙醇溶液少许在硅胶板上点样，每个点直径为2mm左右，点样后用电吹风机热风轻轻吹干。2.展开：在层析缸内放入已配制好的展开剂，把点好样品的薄板斜放入层析缸内进行展开，将盖子盖好。（放14、置薄板时尽量不要振动液面）3 .显色：当溶剂前沿达到薄板3/4高度时，将薄板取出，用铅笔在溶剂前沿作上记号，用吹风机吹干薄板。用喷雾器向薄板喷茚三酮溶液，再放入烘箱内在105条件下加热10min，或用电吹风机吹干，显色。4.计算各种氨基酸的Rf值。二、课堂安排两人共用一个层析缸,每人一个薄板进行层实验；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据，实验报告记录层析完毕所需要时间。要求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题1.影响薄层层析效果的关键步骤是哪一步？生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 7 周 第 5 讲重点与难点1. 薄膜的浸泡、15、吸干和点样2. 注意点样时两侧应留一定空隙主要内容与课堂安排实验五 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、 主要内容学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理。（一）原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素组成，它具有均匀的泡沫样的结构，厚度仅120微米，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分离以及免疫电泳中。（二）操作：1. 浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜1张（7cm×2cm识别出光泽面与无光16、泽面，并在角上用笔做上记号）放在缓冲液中浸泡20分钟。2. 点样：把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器先在放置在白瓷反应板上的血清中沾一下，再在膜条一端1cm处轻轻地水平水平划线（注意样品线两头与膜条两侧保留一定间隙），这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。3. 电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内。用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥，它17、是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的“桥梁”）。膜条上点样的一端靠近负极，注意点样面朝下，点样处不得接触滤纸桥。盖严电泳室。通电。调节电压至160V（稳压操作)，电流强度40mA，电泳时间约为25分钟。4. 染色：电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10分钟。5. 漂洗：将膜条从染色液中取出后移至漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止，可得色带清晰的电泳图谱。二、课堂安排每人一个电泳样品进行实验（四个共用一个电泳仪和卧式电泳槽）；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据，实验报告记录完成电泳所需时间，学习样品的染色和漂洗；要求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题1. 电泳仪的电流18、强度40mA是不是表示流过样品的电流一定是40mA?生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 8 周 第 6 讲重点与难点1正确掌握微量滴定方法主要内容与课堂安排实验六 用甲醛滴定法测定氨基氮一、主要内容初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。（一）原理氨基酸是两极电解质，在水溶液中有如下平衡：R-CH（N+H3）-COOR-CH（NH2）COO+H+-N+H3是弱酸，完全解离时PH为11-12或更高，若用碱滴定-N+H3释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物19、，使上述平衡右移，促使-N+H3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此，可用酚酞作指示剂，用标准的氢氧化钠溶液滴定。（二）操作：1. 取3个25ml的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入0.1当量/升的标准甘氨酸溶液2ml和水5ml，混匀。向3号瓶内加入7ml水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加入2ml甲醛溶液再混匀，分别用0.1当量/升标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮的回收率为实际测得量与加入理论量的比值。实际测得量为滴定第1和20、2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的当量浓度，再乘以14.008。2ml乘以标准甘氨酸的当量浓度再乘14.008，即为加入理论量的毫克数。. 取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法测定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含氨基氮的毫克数。氨基氮（mg/ml）=（V末V对）×NNaOH×14.008/2公式中V末为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。NNaOH为标准氢氧化钠溶液的真实当量浓度。二、课堂安排每人一组进行实验。计算回收率21、及氨基氮的含量。思考题与习题1. 回收率超过100%说明什么问题？生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 9 周 第 7 讲重点与难点1新鲜猪肝糜加适量水煮沸时要煮透。主要内容与课堂安排实验七 过氧化氢酶和过氧化物酶的定性反应一、主要内容掌握过氧化氢酶催化反就的特点，学习酶定性反应的操作。（一）原理过氧化氢酶和过氧化物酶能催化过氧化氢分解释放出新生态氧以氧化某些酚类物质和胺类物质，例如氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙（橙红色）；氧化愈创木脂中的愈创木酸成为兰色的愈创木酸的臭氧化物。（二）操作：1. 准备原料：切碎猪肝（2g），制成22、新鲜猪肝糜。取1g新鲜猪肝糜加适量水煮沸，将水倒去。切碎新鲜白菜叶（2g），越细越好。白菜梗提取液：白菜梗约5g，切成细块至研钵中，加蒸馏水15ml，经白纱布过滤，滤液备用。二、课堂安排每人一组进行实验。按讲义设计的表格进行操作。注意观察现象。表格见讲义。思考题与习题1. 过氧化氢酶的其他用途？生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 10 周 第 8 讲重点与难点1. 蔗糖酶纯度影响实验结果。2. 两种酶分别作用于淀粉和蔗糖水解操作中，注意试管、滴管、移液管等的分开使用，不能混淆。3. 沸水浴操作宜严格进行，否则酶失活不充分，影响现象观察；4. 冰浴23、条件下，酶活力降低，但酶活性不受破坏。主要内容与课堂安排实验八 酶的特性（1）一、主要内容（一）酶的专一性原理酶作用的专一性是酶与一般催化剂的主要区别之一。所谓酶作用的专一性仅对一种或一类相似的物质起一定的催化作用，而对甚物质则不能起催化作用。本实验以蔗糖酶（来源于酵母）及枯草杆菌-淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例来说明酶作用的专一性。淀粉和蔗糖缺乏自由醛基（苷羟基）无还原性。但在-淀粉酶的作用下，淀粉很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖，使之具有还原性。在同样的条件下，-淀粉酶不能催化蔗糖的水解，蔗糖酶能催化蔗糖水解生成具有还原性的葡萄糖，但不能催化淀粉水解。本实验采用本尼迪克特（Benedi24、ct）试剂检测还原糖。（二）温度对酶活性的影响原理酶的催化作用受温度的影响很大。温度对酶化的反应有双重效应，一方面，温度上升可以使反应加快；另一方面，温度升高又可使酶因变性而失活。各种酶的反应有其最适的温度，此时，酶的反应速度最快。与普通化学反应一样，在酶的最适温度以下，温度每升高10，其反应速度相应地增加12倍。至于低温对酶促反应的影响，一般地说，在低温下（如0左右或更低）酶活力降低，但酶活性不受破坏。一旦升高温度也就能恢复其原有的催化活力。本实验以枯草杆菌-淀粉酶和蔗糖酶为例，说明温度对酶活性的影响。（二）操作1取2支试管，各加入本氏试剂2ml，再分别加入1%可溶性淀粉溶液和2%蔗糖溶液各25、4滴，混合均匀后，放在沸水浴中煮23分钟，观察有无红黄色沉淀产生，纯净的淀粉和蔗糖应无红黄色沉淀产生。2-淀粉酶的专一性试验取3支试管，分别加入1%可溶性淀粉3ml，2%蔗糖溶液3ml及蒸馏水3ml。再向3支试管各添加-淀粉酶稀释液1ml，混匀，放入37恒温水浴中保温，15分钟后取出，各加本氏试剂2ml，摇匀后，放在沸水中煮23分钟，观察有无红黄色沉淀产生。3蔗糖酶的专一性试验取3支试管，分别加入1%可溶性淀粉溶液3ml、2%蔗糖溶液3ml及蒸馏水3ml，再向3支试管加蔗糖酶液1ml，混匀，放入37恒温水浴保温5分钟后取出，各本氏试剂2ml，摇匀，放在沸水浴中煮23分钟，观察有无红黄色沉淀产生26、。4温度对-淀粉酶活性的影响取3支试管，编号，各加入0.5%可溶性淀粉溶液3ml分别置于冰水浴，37水浴及沸水浴中，保温5分钟后，各缓缓加入1ml-淀粉酶稀释液（试管勿从水浴中取出）继续保温10分钟，取出37水浴及沸水浴中试管置于冰水浴中冷却后，各加入碘-碘化钾溶液约一滴比较各管颜色，并解释现象。5温度对蔗糖酶活性的影响取3支试管，编号，各加2%蔗糖液3ml，分别置于冰水浴，37及沸水浴中，保温5分钟后，各加1ml蔗糖酶液，继续保温10分钟，取出各加入2ml本氏试剂置于沸水浴中煮23分钟，比较各管颜色，并解释现象。二、课堂安排一人一组分工协作进行实验；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据；要27、求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题1. 为什么酵母的蔗糖酶粗提液专一性作用不明显？2. 酶的最适温度是否为酶的特征常数？3. 为什么酶的反应时间越长，要求最适温度低一些？生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 11 周 第 9 讲重点与难点1准确配制缓冲溶液。2准确记录水浴保温时间，利于掌握唾液淀粉酶活性。主要内容与课堂安排实验九 酶的特性（2）一、主要内容（一）pH对酶活性影响原理酶的活力受环境的pH的影响极为显著，通常在一定的pH范围内才表现它的活性。一种酶活性表现最高时的pH值为该酶的最适pH，低于或高于最适pH时，酶的活性渐28、次降低。不同酶的最适pH不同。本实验以枯草杆菌-淀粉酶来说明pH对酶活性的影响。（二）酶的激活剂和抑制剂原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加称为酶的激活剂；有的物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶作用的需要量很小，并常有特异性。激活剂与辅酶或辅基（或某些金属作为辅基）不同，如果无激活剂存在时，酶仍能表现一定的活性，而辅酶或辅基不存在时，酶则完全不呈活性。维生素C（抗坏血酸）在人体内主要作为酶的激活剂与物质还原剂而发挥作用。它是多种自由基的清除剂，又能与体内的维生素E自由基起作用，使其还原为维生素E，继续发挥抗氧化剂的作用。酪氨酸是皮肤黑色素生物合成的关29、键酶，而铜是酪氨酸酶的激活剂。盐酸是胃蛋白酶的激活剂，氯离子是唾液淀粉酶的激活剂等。本实验以唾液淀粉酶为例，说明氯离子（Cl-）对该酶的激活作用以及铜离子（Cu+2）对该酶的抑制作用。（二）操作1、取8支试管，编号，用吸管按讲义列表比例添加0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备PH为4.47.2的缓冲液。2、取9支试管，编号，将上述8种缓冲液分别吸取3ml，分别加入相应号码的试管中（第18号）第9号试管加pH5.6的缓冲液3ml，然后再向各试管添加0.5%可溶性淀粉溶液2ml，将9支试管放入37恒温水浴中预热510分钟。3、向第9号试管添加-淀粉酶稀释液2ml，摇匀，仍在37恒温水浴30、中保温，1分钟后，每隔15秒钟自第9号试管中取出一滴混合液，置白瓷板空穴中，以碘-碘化钾溶液检验淀粉水解程度，待结果呈橙黄色时，取出试管记下酶作用的时间（自加入酶液时开始）注意：掌握第9号试管的水解程度是本实验成败的关键。4、以1分钟为间隔，依次向第18号试管加入-淀粉酶稀释液2ml，摇匀，并仍在37恒温水浴中保温。然后按第9号管酶作用的时间，依次将各管取出，并立即加入碘-碘化钾溶液2滴，充分摇匀，观察各管呈现的颜色，并说明之。5取3支试管，编号后各加入3ml0.5%可溶性淀粉溶液及1ml稀释唾液。向第一号试管加1ml1%氯化钠溶液，第二号试管加入1ml0.5%硫酸铜溶液，第三号试管加入1ml31、蒸馏水。6将上述3支试管，放入37恒温水浴中保温1015分钟后取出（保温时间因唾液淀粉酶活力而异，可重做一次，以求明显之结果）冷却后分别加入45滴碘碘化钾溶液，观察比较三支试管颜色的深浅，并解释之。二、课堂安排两人一组分工协作进行实验；注意仔细观察实验现象，准确记录实验数据；要求实验前预习，并缴交预习报告和实验报告。思考题与习题举例说明一些酶的激活剂在人体中的作用。生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 12 周 第 10 讲重点与难点1酵母要充分研磨均匀。主要内容与课堂安排实验十 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、主要内容了解核酸的组分，并掌握鉴定核32、酸组分的方法。（一）原理酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。（二）操作：将15g酵母悬浮于90ml 0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000r/min）15分钟将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待RNA沉淀完全后，离心（3000r/min）3分钟。弃去清夜。用95%乙醇洗涤沉淀233、次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。取200mg提取的核酸，加入3当量/升硫酸10ml，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。1嘌呤碱：取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加入约1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。2核糖：取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。3磷酸：取一支试管，加水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热，观察溶液是否变成兰色，说明磷酸是否存在。二、课堂安排每人一组进行实验。RNA提取可合作进行34、。注意观察现象。思考题与习题1. 了解RNA提取的其他方法。生物化学实验教案教师: 杨东升 学时:34(1学分) 专业: 理工学院03生工 第 13 周 第 11 讲重点与难点1SbCl3有潮解性及强腐蚀性，凡接触过SbCl3的玻璃仪器需先用10%盐酸溶液洗涤后，再用水冲洗。2维生素A实验所用仪器和试剂须干燥无水，加醋酐的目的在于脱水。主要内容与课堂安排实验十一 维生素一、主要内容维生素A的定性测定，维生素B1的定性测定，维生素B2的定性测定（一）原理维生素A与SbCl3作用生成兰色，此兰色反应虽非维生素A的特异反应（如胡萝卜素亦有类似反应，不过呈色程度很弱），但一般可用作维生素A的定性测定。维生素B1，在碱性条件下与赤血盐作用，在紫外线照射下，发生兰色荧光。注意：SbCl3遇水生成碱式盐Sb(OH)2Cl，再变成氯氧化锑（SbOCl），此化合物与维生素A不作用，并发生混浊，妨碍实验进行。（二）操作：维生素A：取干燥试管一支，加12滴维生素A及十滴氯仿，混匀，加醋酐2滴及SbCl3-氯仿液2m