巴比妥缓冲液在薄膜电泳提取染色液的作用作用

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-11-16 05:44 标签： 薄膜电泳提取染色液的作用

网友您好，请在下方输入框内输入要搜索的题目：

请输入或粘贴题目内容 搜题

拍照、语音搜题，请扫码下载APP

题目内容 （请给出正确答案）

以醋酸纤维素薄膜为支持物进行血清蛋白电泳，使用pH8.6巴比妥缓冲液，各种蛋白质的荷电状态是（）

A．清蛋白和球蛋白都带负电荷

B．清蛋白和球蛋白都带正电荷

C．清蛋白带负电荷，球蛋白带正电荷

D．清蛋白和α1-球蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷

E．清蛋白、α1、α2-球蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷

更多“以醋酸纤维素薄膜为支持物进行血清蛋白电泳，使用pH8.6巴比妥缓冲液，各种蛋白质的荷电状态是（）A”相关的问题

血清蛋白电泳时通常用PH8.6缓冲液，此时各种蛋白质带有的电荷为A.白蛋白带正电荷，其他蛋白带负电

血清蛋白电泳时通常用PH8.6缓冲液，此时各种蛋白质带有的电荷为

A.白蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷

B.白蛋白和其他蛋白均带负电荷

C.白蛋白和其他蛋白均不带电荷

D.白蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷

E.白蛋白和其他蛋白均带正电荷

血浆蛋白经过醋酸纤维膜电泳分成5条主要的区带，由阳极至阴极的顺序是

A.清蛋白、β、α2、α1、γ-球蛋白

B.清蛋白、γ、α1、α2、β-球蛋白

C.α1、α2、β、γ-球蛋白、清蛋白

D.清蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白

E.β、α1、α2、γ-球蛋白、清蛋白

利用电泳可以将血浆蛋白按照泳动速度进行分类，在电泳图谱中出现5条区带，泳动速度最慢的是A．γ球蛋

利用电泳可以将血浆蛋白按照泳动速度进行分类，在电泳图谱中出现5条区带，泳动速度最慢的是

蛋白质在等电点时，所带电荷之间的关系是A．只带正电荷B．只带负电荷C．静电荷为零D．负电荷大于正电

蛋白质在等电点时，所带电荷之间的关系是

在常规制片中（H-E染色)细胞核的染色原理

A、细胞核带正电荷，呈碱性，易与带负电荷的苏木素碱性染料结合而染色

B、细胞核带正电荷，呈酸性，易与带负电荷的苏木素碱性染料结合而染色

C、细胞核带负电荷，呈酸性，易与带正电荷的苏木素酸性染料结合而染色

D、细胞核带负电荷，呈酸性，易与带正电荷的苏木素碱性染料结合而染色

E、细胞核带负电荷，呈碱性，易与带正电荷的苏木素碱性染料结合而染色

血清清蛋白在pH4.2的缓冲溶液中带正电荷,在有非离子型表面活性剂存在时,可与带负电荷的染料溴甲酚绿（）

某种蛋白质pI=9.7,在pH=8.6的碱性溶液中带什么电荷,电泳时向哪极泳动

A.蛋白质带负电荷,电泳时向负极泳动。

B.蛋白质带负电荷,电泳时向正极泳动。

C.蛋白质带正电荷,电泳时向正极泳动。

D.蛋白质带正电荷,电泳时向负极泳动。

E.蛋白质带静电荷为零,电泳时停在原处。

醋酸纤维素薄膜电泳分离时免疫球蛋白多位于哪一区带

在血浆蛋白电泳中，泳动最慢的蛋白质是A．清蛋白B．α1球蛋白C．α2球蛋白D．β球蛋白E．λ球蛋白

在血浆蛋白电泳中，泳动最慢的蛋白质是

本发明属于属于生物技术领域，用于电泳的缓冲液，尤其涉及硼砂硼酸缓冲液及其在血清醋酸纤维薄膜和脂蛋白琼脂糖凝胶电泳中的应用。

血清醋酸纤维薄膜电泳使用ph为8.6，离子强度为0.06的巴比妥钠/巴比妥缓冲液，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳所用ph为8.6，离子强度分别为0.05和0.075巴比妥钠/巴比妥缓冲液。血清醋酸纤维薄膜电泳实验在医学院生物化学实验教学中非常重要，可以将血浆蛋白分为：清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白；学生可以掌握电泳技术的原理，电泳必须具备的条件和影响电泳的因素等方面的知识。另外，对于掌握血清蛋白的分类和含量有重要的意义，有助于学生理解清蛋白与球蛋白比例倒置在肝硬化的诊断中的作用(正常人清蛋白/球蛋白＝1.5-2.5：1；而肝硬化清蛋白/球蛋白＝0.5：1)。血清琼脂糖凝胶电泳实验可以让学生掌握血清脂蛋白的分类、组成和功能，对于学生掌握血清脂蛋白代谢有十分重要的意义。多年来，这两个实验都使用巴比妥钠/巴比妥缓冲液，巴比妥钠为短时巴比妥类催眠药，对中枢的抑制作用随剂量增加可以达到镇静催眠的作用。巴比妥曾作为催眠药或镇静药应用于临床，但因作用弱、不良反应多、不安全、易成依赖性而被淘汰。由于巴比妥钠和巴比妥是麻醉药品和精神药品类，不能继续再使用。若没有相应的ph和离子强度的缓冲液代替，这两个实验将不能给学生再开设，学生将失去这两个验证理论知识的生物化学实验。因此找到巴比妥钠/巴比妥缓冲液的替代缓冲液就显得十分重要。

本发明提供一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用，目的是使用硼砂、硼酸建立合适的ph及离子强度用于替代巴比妥钠/巴比妥缓冲液，使用在血清醋酸纤维薄膜和血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳中。

本发明采取的技术方案是：

一种硼砂硼酸缓冲液的ph＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075。

一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制ph＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。

一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制ph＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。

一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制ph＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。

本发明所述硼砂硼酸缓冲液在电泳中的应用。

本发明将醋酸纤维薄膜浸泡到ph＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液中10-20分钟。

本发明使用ph＝8.6，离子强度为0.05硼砂硼酸缓冲液配制0.035％琼脂糖凝胶步骤是：称取琼脂糖0.035g，加入该硼砂硼酸缓冲液100ml，置微波炉中溶解，分装于三角烧瓶中，冰箱保存。

本发明使用ph＝8.6，离子强度为0.075硼砂硼酸缓冲液作为血清琼脂糖凝胶电泳槽内的缓冲液。

本发明的优点是：硼砂硼酸缓冲液使用硼砂和硼酸两种化学药品进行配制，这两种化学药品容易购买，价格便宜。缓冲液的ph容易调整，离子强度容易进行计算，适合开展血清醋酸纤维薄膜电泳和血清脂蛋白电泳实验，其中配制0.06离子强度和ph8.6的硼砂硼酸缓冲液，可以用于血清醋酸纤维薄膜电泳实验，配制的0.05和0.075离子强度及ph8.6的硼砂硼酸缓冲液，用于血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳，完全可以替代巴比妥缓冲液。另外，硼砂硼酸缓冲液根据需要还可以使用在其它不同ph及不同离子强度的生命科学实验研究中。使用硼砂硼酸缓冲液效果非常好，血清醋酸纤维薄膜电泳区分出正确的蛋白质条带，而血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳也区分出脂蛋白条带。条带清晰，明确和完整，达到了预期的实验效果，为正常开展实验研究和实验教学提供了支持。

图1是使用本发明0.06离子强度和ph8.6的硼砂硼酸缓冲液的血清醋酸纤维薄膜电泳图；

图2是使用本发明0.05和0.075离子强度及ph8.6的硼砂硼酸缓冲液的血清琼脂糖凝胶电泳图。

硼砂na2b4o7·10h2o，分子量为381.43，硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存；硼酸h3bo3分子量为61.84。

实施例1、配制ph＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液：

取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.02m，硼酸的浓度为0.0534m；

实施例2、配制ph＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液

取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.0167m，硼酸的浓度为0.0445m；

实施例3、配制ph＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液

取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.025m，硼酸的浓度为0.0667m；

实施例4、血清醋酸纤维薄膜电泳

2、硼砂硼酸缓冲液，ph＝8.6，离子强度0.06；

3、染色液：氨基黑10b称取0.5g溶于50ml甲醇中，再加入冰醋酸10ml及蒸馏水40ml；

4、漂洗液：95％乙醇45ml，加冰醋酸5ml及蒸馏水50ml混匀；

1、醋酸纤维薄膜处理：将醋酸纤维薄膜浸泡到硼砂硼酸缓冲液10-20分钟，将醋酸纤维薄膜取出，用滤纸轻轻吸去多余的缓冲液；

2、点样：吸取一滴血清于玻璃板上，用点样刀蘸取血清，然后将钢口平直印于醋酸纤维薄膜的一端2厘米处，然后将点样端放到电泳槽的阴极端用4层滤纸搭桥；

3、通电；电压110伏，通电45分钟，断电后，将薄膜从电泳槽取出，使用滤纸轻轻吸去多余的水份；

4、染色和洗脱：电泳好的醋酸纤维薄膜浸泡于染色液中5分钟，使用漂洗液洗数次，可以看到清晰的5条色带，分别为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白，可以使用分光光度计进行定量，见图1。

实施例5、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

1、硼砂硼酸缓冲液ph＝8.6:用于电泳时的离子强度为0.075，配制琼脂糖凝胶时的离子强度为0.05；

2、琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.035g，加入硼砂硼酸缓冲液ph＝8.6、离子强度0.05，100ml，置沸水浴中溶解，分装于试管中，冰箱保存；

3、染色液：苏丹黑0.1g，溶干异丙醇10m1中；

1、琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.035g，加入硼砂硼酸缓冲液ph＝8.6、离子强度0.05，100ml，置微波炉中溶解，分装于三角烧瓶中，冰箱保存；

2、预染血清：血清0.2m1加苏丹黑染色液0.02ml于小试管中混和后置37℃水浴染色30分钟，然后离心5分钟，2000rpm，取上清液备用；

3、制备琼脂糖凝胶板：已配制的琼脂糖凝胶于微波炉中加热融化，在距凝胶板一端约2cm处放入一根小铁棒，用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片，每个载玻片约用2.5ml，均匀浇到载玻片上，静置约20分钟后凝固；

4、点加预染血清：待凝胶板凝固后，用磁铁吸出小铁棒，留出的小槽用滤纸小心吸于水分，用微量加样器吸取经预染的血清约12μ1，注入凝胶板的小槽内；

5、电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽内，样品端放置于阴极，两块三层纱布于ph＝8.6、离子强度0.075的硼砂硼酸缓冲液中浸湿，轻轻贴在凝胶板两端，纱布的下端浸入电泳槽内的离子强度0.075的硼砂硼酸缓冲液中，接通电源，电压110伏，时间45分钟，断电后可见分离的区带，分别为α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和留在点样孔的乳糜微粒，见图2。

我要回帖

更多关于 薄膜电泳提取染色液的作用 的文章

 

随机推荐