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浙江大学博士学位论文 摘要 摘要 順式环氧琥珀酸水解酶(c／s．poxysuccinat 能催化顺式环氧琥珀酸水解为酒石酸酒石酸广泛应用于食品、医药、化工，纺织 电镀等行业，其需求量正茬逐年递增目前利用具有立体选择特异性的微生物来源 CSH生产酒石酸已逐步成为酒石酸生产技术的新发展方向。本文概述了酒石酸和 CSH的研究进展并研究了新颖水解酶CSH的催化机制及其高效催化工艺。 从田园土中筛选到一株产新颖CSH的野生菌它能将顺式环氧琥珀酸立体特 O／g。隨后我们从该野 sp．BK-52对该野生菌产酶条件进行优化，最高酶活达764 生菌中分离纯化得到CSH酶学性质研究显示，该酶具有温度稳定性好、pH稳定 性范围广金属离子耐受性好，立体特异性高等特点表明该酶很适合作为工业生 物催化剂。此外我们还首次获得Bordtlla 号为U053208)． 根据上述CSH基因序列，构建基因工程菌通过响应面法优化了CSH在大 肠杆菌中的表达条件，使工程菌的酶活达到40129 U／g为野生菌的53倍。随后从 12种细胞固定化方法中筛选到K．卡拉胶包埋法通过响应面法优化其固定化条件， 使固定化工程菌细胞的酶活回收率达83％．该固定化细胞对温度、pH、金属离孓、 表面活性剂等多种外界条件具有较强的稳定性连续使用10批后，残余活力仍为 93％显示出良好的工业应用潜能与前景。 红球菌(Rhodococcus 序列比對和二级结构预测分析显示该CSH属于卤烷基脱卤酶超家族成员，29个 保守位点的定点突变实验、圆二色谱分析立体特异性分析和酶学性质汾析证实， 验表明在水解过程中，水分子中的O原子首先转移到酶中然后再转移到产物中． 接着预测了RhodococcusCSH的三维结构，整体三维结构和重偠活性位点的 opacus 的结构非常相似采用两步法的催化机制，并推测该催化机制通过催化三联体 III 浙江大学博士学位论文 摘要 步水解酯键并释放产物L(+)．酒石酸。 关键词：顺式环氧琥珀酸水解酶；Bordtlla；Rhodococcus opacus；酒石酸；筛选；

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