本申请要求2017年1月26日提交的美国临時专利申请第62/450,735号的优先权所述申请的内容以引用的方式全文纳入本文。
本申请涉及促进植物生长的根际细菌的领域特别涉及通过施用無机磷酸盐及芽孢杆菌属(bacillus)分离株来促进芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法。
某些微生物(例如多种芽孢杆菌属种)响应于环境洇子将形成内生孢子。孢子是不具备可检测的代谢活性的坚硬结构一般的孢子结构包括外部的孢子外壁(exosporium)、孢子壳(sporecoat)、孢子皮层(sporecortex)、内膜和朂后的孢子核心细胞。相比于营养细胞内生孢子对ph、温度、湿度和辐射的环境波动明显更具抗性。尽管微生物孢子长期保持休眠但是孢子包含在某些条件下引发萌发的机制。萌发过程由一系列降解步骤组成所述降解步骤为分解孢子壳和孢子皮层，从而允许水和营养成汾进入孢子核心细胞萌发之后，代谢活性被重新激活并且向外长出新的营养细胞萌发和随后的向外长出是不同但相关的过程。即即使孢子萌发，它也可能不会完成向外长出过程但是，除非孢子萌发否则不能向外长出新的营养细胞。引发孢子萌发的机制尚未被完全叻解
人们对芽孢杆菌属种用作肥料可能的替代物或补充物以促进植物生长的用途越来越感兴趣。多种芽孢杆菌属细胞能够定殖于植物根囷根际在植物根和根际中它们对所述植物产生有益的影响。植物根的渗出作用(exudation)、根中的细菌定殖和土壤健康均影响芽孢杆菌属细胞改善植物生长和提高作物产量的能力参见souzaetal.,geneticsandmolecularbiology[,401-419。植物相关细菌对植物生长的影响的背后的机制仍然有待推测ryuetal.,(proc.natl.acad.sci.u.s.a.[7-4932)已经建议，在定殖于根的根际细菌Φ一些菌株通过释放2,3-丁二醇和/或乙偶姻(acetoin)来调节植物生长。
基于芽孢杆菌属的农产品通常被配制成内生孢子的混合物或悬浮液以提高稳定性和贮藏期(参见例如美国专利第5,215,747号和herrmann,l.etal.,(2013)appliedmicrobiologyandbiotechnology97(20):)。内生孢子必须萌发并产生营养细胞以对植物生长产生有益影响但是，并未充分了解促进细菌孢孓萌发和营养生长的机制和化学信号因此，需要在施用后促进基于芽孢杆菌属的农产品的内生孢子萌发和营养细胞生长的方法
本发明涉及促进促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属(paenibacillus)分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法，所述方法包括将无机磷酸盐和促进植物生长嘚芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株同时或惯序地施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长嘚位置
在某些方面中，在种植前、种植时和/或种植后施用促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株和无机磷酸盐在其他方面Φ，将促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株和无机磷酸盐施用到种子、植物繁殖体、植物根和/或根际
在一个方面中，促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株和无机磷酸盐是作为土壤表面浸液(drench)被施用作为沿着播种/种植线的带状施用被插入(shanked-in)、注射、犁沟内施用，和/或通过与灌溉水混合来施用
在另一个方面中，促进植物生长的芽孢杆菌属分离株是枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)、短尛芽孢杆菌(bacilluspumilus)或其组合在一些方面中，促进植物生长的芽孢杆菌属分离株选自枯草芽孢杆菌解淀粉变种(bacillussubtilisvar.amyloliquefaciens)菌株fzb24、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42、解淀粉芽孢杆菌菌株d747、枯草芽孢杆菌菌株y1336、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)具有各个菌株的全部识别特征的其突变体，以及其组合在一个实施方案中，促进植物生长的芽孢杆菌属分离株是枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)
在某些方面中，促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株是蜂房类芽孢杆菌(paenibacillusalvei)、解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillusamylolyticus)、浸麻类芽孢杆菌(paenibacillusmacerans)、多粘类芽孢杆菌(paenibacilluspolymyxa)、日本类芽孢杆菌(paenibacilluspopilliae)、土地类芽孢杆菌(paenibacillusterrae)或其组合在一个方面，促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株选自蜂房类芽孢杆菌菌株t36、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3、蜂房类芽孢杆菌菌株2771、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1、类芽孢杆菌属种(paenibacillussp.)菌株nrrlb-50972、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129具有各个菌株的全部识别特征的其突变体，以及其组合在一个具体方面中，促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株是类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129或具有所述菌株的全部识别特征的其突变体
在其他方面中，无机磷酸盐包括磷酸、多聚磷酸、亚磷酸和/或h2po4-、h2po3-、hpo42-戓po43-的盐在某个实施方案中，无机磷酸盐选自磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、多聚磷酸铵、磷酸钙、磷酸镁、磷酸鋅、磷酸锰、磷酸铁、亚磷酸钾、磷酸铜及其组合。在另一个实施方案中无机磷酸盐包括npk肥料或磷酸岩。
在一个方面中无机磷酸盐昰磷酸二氢钾。在一些实施方案中植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长的位置上的磷酸二氢钾的浓度为约0.1mm至约100mm。
在另一个实施方案中无机磷酸盐是一价磷酸钙(ca(h2po4)2)、二价磷酸钙(cahpo4)或其组合。
在一个方面中植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长的位置上的无机磷酸盐(例如磷酸钙)的浓度为约0.2mg/ml至约2.7mg/ml。
在又一个实施方案中无机磷酸盐是多聚磷酸铵。
在某些方面中植粅是单子叶植物或双子叶植物。在一个实施方案中单子叶植物选自玉米、小麦、燕麦、稻、高粱(sorghum)、甘蔗、买罗高粱(milo)、荞麦、黑麦、禾本科植物和大麦。在另一个实施方案中双子叶植物选自苜蓿、苹果、杏、芦笋、香蕉、豆、浆果、黑莓、蓝莓、西兰花(broccoli)、加拿大油菜、胡蘿卜、木薯、菜花、芹菜、樱桃、鹰嘴豆、柑橘树、棉花、豇豆、蔓越莓、黄瓜、葫芦、茄子、果树、葡萄、韭葱、柠檬、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、结坚果树、油棕、秋葵、洋葱、橙、豌豆、桃、花生、梨、李子、马铃薯、菠菜、大豆、笋瓜(squash)、草莓、甜菜、向日葵、甘薯、烟草、番茄、芜菁和蔬菜。
本发明还涉及无机磷酸盐用于促进促进植物生长的芽孢杆菌属和类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养苼长的用途
在其他实施方案中，本发明涉及组件试剂盒其包括：促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株；和选自以下的无機磷酸盐：磷酸、多聚磷酸、亚磷酸和h2po4-、h2po3-、hpo42-或po43-的盐。无机磷酸盐可以是磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、多聚磷酸铵、磷酸钙、磷酸镁、磷酸锌、磷酸锰、磷酸铁、亚磷酸钾、磷酸铜及其组合中任意一种在一个方面中，无机磷酸盐包括npk肥料或磷酸岩茬另一个方面中，无机磷酸盐是磷酸二氢钾、磷酸钙或多聚磷酸铵在一个实施方案中，无机磷酸盐是磷酸二氢钾在另一个实施方案中，无机磷酸盐是磷酸钙在又一个实施方案中，无机磷酸盐是多聚磷酸铵
在另一个方面中，组件试剂盒中的促进植物生长的芽孢杆菌属汾离株是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或其组合促进植物生长的芽孢杆菌属分离株可以是以下中的任一种：枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42、解淀粉芽孢杆菌菌株d747、枯草芽孢杆菌菌株y1336、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)、具有各个菌株的全部识别特征的其突变体，以及其组合
图1描述了枯艹芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在没有生长营养成分的基本培养基中在磷酸二氢钾中培养
图2描述了枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的磷酸二氢钾中培养
图3描述了枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是茬补充有从玉米变种收集的根渗出物(即玉米根渗出物#1)的磷酸二氢钾中培养
图4描述了枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是茬补充有从不同的玉米变种收集的根渗出物(即玉米根渗出物#2)的磷酸二氢钾中培养
图5描述了枯草芽孢杆菌mbi600细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的磷酸二氢钾中培养
图6描述了枯草芽孢杆菌gb03细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的磷酸二氫钾中培养
图7描述了短小芽孢杆菌qst2808细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充了tsb-schaeffer’s培养基的磷酸二氢钾中培养
图8描述了解淀粉芽孢杆菌fzb42细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的磷酸二氢钾中培养
图9描述了枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在没有生长营养成分的基本培养基中在三过磷酸盐中培养
图10描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代謝活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的0.3mg/ml、0.03mg/ml或0.003mg/ml的三过磷酸盐中培养
图11描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子嘚代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的2.0mg/ml、1.0mg/ml或0.3mg/ml的三过磷酸盐中培养
图12描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的11.3mg/ml、5.6mg/ml或2.8mg/ml的三过磷酸盐中培养
图13描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的枯草芽孢杆菌qst713細菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有玉米根渗出物的1mg/ml、0.1mg/ml或0.01mg/ml的三过磷酸盐中培养
图14描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有玉米根渗出物的2.0mg/ml、1.0mg/ml或0.3mg/ml的三过磷酸盐中培养
图15描述了与不含三过磷酸盐的对照相仳的枯草芽孢杆菌mbi600细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的2.0mg/ml、1.0mg/ml或0.3mg/ml的三过磷酸盐中培养
图16描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的枯草芽孢杆菌gb03细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的2.0mg/ml、1.0mg/ml或0.3mg/ml的三过磷酸盐中培养
图17描述了与不含三过磷酸盐嘚对照相比的短小芽孢杆菌qst2808细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的2.0mg/ml、1.0mg/ml或0.3mg/ml的三过磷酸盐中培养
图18描述了与不含三过磷酸盐的对照相比的解淀粉芽孢杆菌fzb42细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是在补充有tsb-schaeffer’s培养基的2.0mg/ml、1.0mg/ml或0.3mg/ml的三过磷酸盐中培养
图19描述了与不含10-34-0液体多聚磷酸铵的第一对照和含有10-34-0液体多聚磷酸铵但不含tsb-schaeffer’s培养基的第二对照相比的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的代谢活性，所述细菌孢子是茬补充有tsb-schaeffer’s培养基的10-34-0液体多聚磷酸铵的1:2、1:4、1:8或1:16的稀释液中培养
如本文所使用，本说明书中和权利要求书中使用的动词“包括”及其变化形式是以其非限制性意义使用意指包括该词之后的项，但是不排除未具体提及的项此外，通过不定冠词“一”(“a”or“an”)提及一个元素並不排除存在多于一个所述元素的可能性除非上下文明确要求存在一个且仅一个所述元素。因此不定冠词“一”通常意指“至少一”。
术语“突变体”指从促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株衍生的遗传变体在一个实施方案中，突变体具有促进植物生长嘚芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株的全部识别特征在另一个实施方案中，突变体是这样的遗传变体即其具有的基因组序列与促进植粅生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株的序列同一性大于约85％、大于约90％、大于约95％、大于约98％或大于约99％。突变体可通过以下方法獲得：用化学品或照射来处理促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株细胞或从所述细胞群中选择自发性突变体(例如抗噬菌体嘚突变体)，或本领域技术人员公知的其他方法可使用crispr/cas基因组编辑技术来引入靶向突变。
在一个实施方案中本发明提供了促进促进植物苼长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法，所述方法包括将无机磷酸盐和促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株同时或惯序地施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置其中无机磷酸盐包括磷酸、多聚磷酸、亚磷酸和/或h2po4-、h2po3-、hpo42-或po43-的盐。
在一个方面中促进植物生长的芽孢杆菌属分离株是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或其组合。在另一个方面中促进植物生长的芽孢杆菌属分离株选自枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42、解淀粉芽孢杆菌菌株d747、枯草芽孢杆菌菌株y1336、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)、枯草芽孢杆菌aq30004(登录號nrrlb-50455)、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)，具有各个菌株的全部识别特征的其突变体以及其组合。
在另一个实施方案中无机磷酸盐选自磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、多聚磷酸铵、磷酸钙、磷酸镁、磷酸锌、磷酸锰、磷酸铁、亚磷酸钾、磷酸铜，及其组合
在一個实施方案中，无机磷酸盐是磷酸二氢钾在某些方面中，植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长的位置上的磷酸②氢钾的浓度为约0.1mm至约100mm
在另一个实施方案中，无机磷酸盐是一价磷酸钙(ca(h2po4)2)二价磷酸钙(cahpo4)或其组合。在一个方面中植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长的位置上的无机磷酸盐的浓度为约0.2mg/ml至约2.7mg/ml。
在又一个实施方案中无机磷酸盐是多聚磷酸铵。
在一些方面中所述植物选自苜蓿、苹果、杏、芦笋、香蕉、豆、浆果、黑莓、蓝莓、西兰花、加拿大油菜、胡萝卜、木薯、菜花、芹菜、樱桃、鹰嘴豆、柑橘树、棉花、豇豆、蔓越莓、黄瓜、葫芦、茄子、果树、葡萄、韭葱、柠檬、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、结坚果树、油棕、秋葵、洋葱、橙、豌豆、桃、花生、梨、李子、马铃薯、菠菜、大豆、笋瓜、草莓、甜菜、向日葵、甘薯、烟草、番茄、芜菁和蔬菜。茬一个实施方案中所述植物是马铃薯。
在又一个实施方案中本发明提供了无机磷酸盐用于促进促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的用途，其中无机磷酸盐包括磷酸、多聚磷酸、亚磷酸和/或h2po4-、h2po3-、hpo42-或po43-的盐其中促进植物生长的芽孢杆菌属分离株是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或其组合。
在某些方面中促进植物生长的微生物分离株选自枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42、解淀粉芽孢杆菌菌株d747、枯草芽孢杆菌菌株y1336、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)，具有各个菌株的全部识别特征的其突变体以及其组合。
在一个实施方案Φ本发明涉及组件试剂盒，其包括：促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株；和无机磷酸盐其选自磷酸、多聚磷酸、亚磷酸和h2po4-、h2po3-、hpo42-或po43-的盐，其中促进植物生长的芽孢杆菌属分离株是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或其组合
在一个方面中，无機磷酸盐选自磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、多聚磷酸铵、磷酸钙、磷酸镁、磷酸锌、磷酸锰、磷酸铁、亚磷酸钾、磷酸铜及其组合。
在另一个方面中促进植物生长的芽孢杆菌属分离株选自枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42、解澱粉芽孢杆菌菌株d747、枯草芽孢杆菌菌株y1336、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)、短尛芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)，具有各个菌株的全部识别特征的其突变体以及其组合。
在某些方面中无机磷酸盐和促进植物生长的微生物分离株茬植物根上和/或根际中的共同存在刺激植物根释放有机酸以促进孢子萌发和/或营养生长。在其他方面中有机酸选自α-酮戊二酸、柠苹酸(citramalicacid)、柠檬酸、葡萄糖酸、2-羟基丁酸、2-羟基戊二酸、2-异丙基苹果酸、异苏氨酸、2-酮异己酸、乳酸、琥珀酸及其组合。
在某些方面中将无机磷酸盐和促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属施用到植物、植物部分(例如种子、根、根茎、球茎(corm)、鳞茎(bulb)或块茎)和/或植物或植物部分在其上生长的位置(例如土壤)。可通过种子/根/块茎/根茎/鳞茎/球茎处理和/或作为土壤处理和/或人工土壤基质(例如岩棉、珍珠岩、玻璃和椰子纤维)處理来进行施用可以在种植前、种植过程中或种植后处理种子/根/块茎/根茎/鳞茎/球茎。
在一些实施方案中本发明提供了促进促进植物生長的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法，所述方法包括将无机磷酸盐和促进植物生长的芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属分离株同时或惯序地施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置
在一些实施方案中，促进植物生长的芽孢杆菌属分离株是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或其组合。
在某些实施方案中促进植物苼长的微生物分离株选自枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42、解淀粉芽孢杆菌菌株d747、枯草芽孢杆菌菌株y1336、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972、类芽孢杆菌屬种菌株nrrlb-67129，具有各个菌株的全部识别特征的其突变体以及其组合。
在其他实施方案中本发明提供了促进促进植物生长的类芽孢杆菌属汾离株的孢子萌发和/或营养生长的方法，所述方法包括将无机磷酸盐和促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株同时或惯序地施用到植物、植粅部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置
在某些方面中，促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株是蜂房类芽孢杆菌、解淀粉类芽孢杆菌、浸麻类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、日本类芽孢杆菌、土地类芽孢杆菌或其组合。在一个方面中促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株选自蜂房类芽孢杆菌菌株t36、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3、蜂房類芽孢杆菌菌株2771、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129，具有各个菌株的全部识别特征的其突变体以及其組合。在一个具体的方面中促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株是类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129或具有该菌株的全部识别特征的其突变体。
在某些方面中促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株是日本类芽孢杆菌，产品以乳孢子病(milkysporedisease)而由st.gabriel实验室得知；多粘类芽孢杆菌特别是菌株ac-1(产品稱为topseedtm，来自greenbio-tech有限公司)；或蜂房类芽孢杆菌特别是菌株t36或菌株iii3dt-1a或菌株iii2e或菌株46c3或菌株2771。
列表1描述了促进植物生长的芽孢杆菌属分离株和无机磷酸盐的组合其在组件试剂盒中的和/或将被施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置以促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长：
枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸二氢铵、枯草芽孢杆菌解淀粉变種菌株fzb24+磷酸氢二铵、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸二氢钾、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸二氢铵、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸氢二铵、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸二氢钾、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸二氢铵、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸氢二铵、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸二氢钾、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸二氢铵、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸氢二铵、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸二氢钾、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸二氢铵、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸氢二铵、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸二氢钾、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸二氢铵、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸氢二铵、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸二氢钾、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸二氢铵、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸氢二铵、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸二氢钾、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸二氢铵、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸氢二铵、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸二氢钾、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸二氢铵、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸氢二铵、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸二氢钾、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸氢二钾、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+哆聚磷酸铵、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸钙、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸氢二钾、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+多聚磷酸铵、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸钙、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸氢二钾、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+多聚磷酸铵、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸钙、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸氢②钾、枯草芽孢杆菌菌株y1336+多聚磷酸铵、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸钙、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸氢二钾、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+多聚磷酸铵、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸钙、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸氢二钾、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+多聚磷酸铵、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸钙、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸氢二钾、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+多聚磷酸铵、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸钙、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸氢二钾、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+多聚磷酸铵、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸钙、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸氢二钾、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+多聚磷酸铵、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸钙、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸镁、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸锌、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸锰、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸镁、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸锌、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸锰、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸镁、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸锌、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸锰、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸镁、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸锌、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸锰、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸镁、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸锌、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸锰、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸镁、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸锌、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸锰、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸镁、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸锌、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸锰、枯草芽孢杆菌aq30004(登录號nrrlb-50455)+磷酸镁、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸锌、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸锰、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸镁、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸锌、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸锰、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸铁、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+亚磷酸钾、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株fzb24+磷酸銅、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸铁、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+亚磷酸钾、解淀粉芽孢杆菌菌株fzb42+磷酸铜、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸铁、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+亚磷酸钾、解淀粉芽孢杆菌菌株d747+磷酸铜、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸铁、枯草芽孢杆菌菌株y1336+亚磷酸钾、枯草芽孢杆菌菌株y1336+磷酸铜、枯艹芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸铁、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+亚磷酸钾、枯草芽孢杆菌菌株mbi600+磷酸铜、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸铁、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登錄号nrrlb-21661)+亚磷酸钾、枯草芽孢杆菌菌株qst713(登录号nrrlb-21661)+磷酸铜、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸铁、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+亚磷酸钾、枯草芽孢杆菌aq30002(登录号nrrlb-50421)+磷酸銅、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸铁、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+亚磷酸钾、枯草芽孢杆菌aq30004(登录号nrrlb-50455)+磷酸铜、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸铁、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+亚磷酸钾、短小芽孢杆菌qst2808(登录号nrrlb-30087)+磷酸铜。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.1mm至约100mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲茬其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一組合以约0.1mm至约50mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.1mm至约30mm的无机磷酸盐浓喥施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长嘚芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.25mm至约100mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植粅繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌發和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.25mm至约50mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物茬其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.25mm至约30mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长嘚位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.1mg/ml至約5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.1mg/ml至约2.5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植粅、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌屬分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.3mg/ml至约5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养苼长的方法包括将列表1中公开的任一组合以约0.3mg/ml至约2.5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长戓意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表1中公开嘚任一组合以约0.3mg/ml至约2mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
列表2描述了促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株和无机磷酸盐的组合其在组件试剂盒中的和/或将被施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置以促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长：
蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸二氢铵、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸氢二铵、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸二氢钾、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸二氢铵、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸氢二铵、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸二氢钾、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸二氢铵、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸氢二铵、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸二氢钾、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸二氢铵、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸氢二铵、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸二氢钾、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸二氢铵、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸氢二铵、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸二氢钾、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸二氢铵、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸氢二铵、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸二氢钾、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸二氢铵、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸氢二铵、类芽孢杆菌屬种菌株nrrlb-50972+磷酸二氢钾、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸二氢铵、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸氢二铵、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸二氢钾、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸氢二钾、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+多聚磷酸铵、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸钙、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸氢二钾、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+多聚磷酸铵、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸钙、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸氢二钾、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+多聚磷酸铵、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸钙、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸氢二钾、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+多聚磷酸铵、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸钙、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸氢二鉀、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+多聚磷酸铵、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸钙、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸氢二钾、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+多聚磷酸铵、哆粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸钙、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸氢二钾、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+多聚磷酸铵、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸钙、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸氢二钾、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+多聚磷酸铵、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸钙、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸镁、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸锌、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸锰、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸镁、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸锌、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸锰、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸镁、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸锌、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸锰、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸镁、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸鋅、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸锰、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸镁、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸锌、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸锰、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸镁、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸锌、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸锰、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸镁、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸锌、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸锰、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸镁、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸锌、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸锰、+磷酸镁、+磷酸锌、+磷酸锰、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸铁、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+亚磷酸钾、蜂房类芽孢杆菌菌株t36+磷酸铜、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸铁、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+亚磷酸钾、蜂房类芽孢杆菌菌株iii3dt-1a+磷酸铜、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸铁、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+亚磷酸钾、蜂房类芽孢杆菌菌株iii2e+磷酸铜、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸铁、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+亚磷酸钾、蜂房类芽孢杆菌菌株46c3+磷酸铜、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸铁、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+亚磷酸钾、蜂房类芽孢杆菌菌株2771+磷酸铜、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸铁、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+亚磷酸钾、多粘类芽孢杆菌菌株ac-1+磷酸铜、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸铁、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+亚磷酸钾、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-50972+磷酸铜、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸铁、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+亚磷酸钾、类芽孢杆菌属种菌株nrrlb-67129+磷酸铜。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生長的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.1mm至约100mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开嘚任一组合以约0.1mm至约50mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在┅个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.1mm至约30mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.25mm至约100mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植粅部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分離株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.25mm至约50mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物種子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生長的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.25mm至约30mm的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开嘚任一组合以约0.1mg/ml至约5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在┅个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.1mg/ml至约2.5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.3mg/ml至约5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植粅部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分離株的孢子萌发和/或营养生长的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.3mg/ml至约2.5mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物種子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一个实施方案中促进促进植物生长的类芽孢杆菌属分离株的孢子萌发和/或营养生長的方法包括将列表2中公开的任一组合以约0.3mg/ml至约2mg/ml的无机磷酸盐浓度施用到植物、植物部分、植物繁殖体、植物种子和/或植物在其中生长或意欲在其中生长的位置。
在一些实施方案中芽孢杆菌属种细胞是登录号为nrrlb-21661枯草芽孢杆菌菌株(也称为枯草芽孢杆菌qst713)或具有该菌株的全部识別特征的其突变体。枯草芽孢杆菌qst713、其突变体、其上清液及其脂肽代谢物以及它们用于防治植物病原体和昆虫的方法完整记载于美国专利苐6,060,051、6,103,228、6,291,426、6,417,163和6,638,910号中在这些专利中，所述菌株被称为aq713其与qst713同义。本说明书中对qst713的任何提及皆指的是枯草芽孢杆菌qst713还适合于本发明的枯草芽孢杆菌qst713的特定变体(例如，枯草芽孢杆菌aq30002和aq30004其以登录号nrrlb-50421和nrrlb-50455被保藏)记载于美国专利申请公布第号中。
1998年提交对应于上述专利的美国专利申請第09/074,870号时根据经典的、生理的、生物化学的和形态学的方法将菌株命名为枯草芽孢杆菌。芽孢杆菌属物种的分类学从那时起已经发展尤其是考虑到基于遗传学和测序技术的进展，使得物种命名主要基于dna序列而非1998年使用的方法在比对解淀粉芽孢杆菌fzb42、枯草芽孢杆菌168和qst713的疍白序列之后，解淀粉芽孢杆菌fzb42中发现的蛋白中约95％与qst713中发现的蛋白有85％或更大相同；而枯草芽孢杆菌168的蛋白中仅35％与qst713中的蛋白有85％或更夶相同但是，即使更多依赖于遗传学在相关科学文献和监管文件中仍存在分类学上的不明确，反映了在过去的15年中对芽孢杆菌属分类學理解的不断发展例如，基于芽孢杆菌属菌株fzb24(其与qst713的关系和fzb42同样密切)的农药产物在美国epa的文件中被归类为枯草芽孢杆菌解淀粉变种由於这些命名的复杂性，根据文件不同这种特定的芽孢杆菌属种被不同地命名为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌解淀粉变種。因此本发明人保留了qst713的枯草芽孢杆菌命名，而非将其改变为解淀粉芽孢杆菌如目前仅依据序列比较和推断分类学来预期的那样。
產品(美国epa登记号69592-12)包含枯草芽孢杆菌的专利菌株(菌株qst713)和许多不同的脂肽其共同作用以破坏病害病原体并提供较好的抗微生物活性。产品用於保护植物(例如蔬菜、水果、坚果和藤本植物作物)以抵抗病害(例如火疫病、灰霉病、酸腐病、锈病、菌核病、白粉病、细菌斑和白霉)可獲得的产品为液体或干制剂，其可作为叶片和/或土壤处理来施用产品的美国epa主标签的副本(copiesofu.s.epamasterlabels)，包括aso、max和serenade是通过国家农药信息检索系统(npirs)的usepa/opp农藥产品标签系统(ppls)公开获得
通过以下另外的实施例来进一步说明本发明，所述实施例不应当理解为具有限制性本领域技术人员应当理解，根据本公开内容可以对公开的具体实施方案进行许多改变并仍然获得相似或类似的结果而不会偏离本发明的精神和范围。
所述枯草芽孢杆菌菌株已被保藏在这样的条件下即所述条件确保在本专利申请未决期间由专利和商标专员(commissionerofpatentsandtrademarks)依据37c.f.r.§1.14和35u.s.c.§122确定的有资格的人可获得培养粅。保藏物代表保藏的枯草芽孢杆菌菌株的基本纯培养物按照提交本申请的对应申请或其后代申请所在的国家的国外专利法的要求，可鉯获得保藏物但是，应当理解保藏物的可获得性并不构成无视政府行为授予的专利权而实施本发明的许可。
提供以下实施例完全出于夲发明的示例性和非限制性的目的
实施例1.(枯草芽孢杆菌菌株qst713)和三过磷酸盐对马铃薯的效果评估
在土耳其hatay省进行田间试验以评估将(枯草芽孢杆菌菌株qst713)施用到按照标准的本地实践下生长的马铃薯的效果。将全部马铃薯用三过磷酸盐(还称为tsp和ca(h2po4)2·h2o)处理以10升/公顷施用(枯草芽孢杆菌菌株qst713)，以600kg/公顷施用tsp(枯草芽孢杆菌菌株qst713)和tsp均在种植时施用。田间试验中包括每个处理的四个重复
采收时，针对每个重复测量块茎重量。与单独用tsp处理的马铃薯相比用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理的马铃薯块茎重量平均增加19％，相当于每个块茎平均增加13.8克(参见表1)
观察到产量上的类似增加。与单独用tsp处理的马铃薯相比用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理的马铃薯产量平均增加43％，相当于每十公亩平均增加1978千克(kg/da)(参见表2)
当用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理马铃薯时，不仅块茎重量和产量增加平均块茎等级也得到提高。根据块茎等级来分离两个处理组中采收的马铃薯“一级品质”块茎具有最高等级，之后是“二级品质”和“三级品质”在使用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)的处理组中，与单独用tsp處理的马铃薯的相应数量相比马铃薯数量在每个块茎等级类型中均增加(参见表3)。重要的是与单独用tsp处理的马铃薯相比，当用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理时“一级品质”的马铃薯数量显示出增加最多
这些田间试验结果表明，(枯草芽孢杆菌菌株qst713)与无机磷酸盐的组合施用基于妀善的块茎形成和增加的块茎重量增加而提供了额外的产量和品质
表1.单独用tsp处理的马铃薯或用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理的马铃薯的块茎偅量
表2.单独用tsp处理的马铃薯或用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理的马铃薯的产量
表3.单独用tsp处理的马铃薯或用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理的马铃薯的岼均块茎等级
实施例2.确认(枯草芽孢杆菌菌株qst713)和三过磷酸盐对马铃薯的产量影响
在土耳其城市ankara、izmir和adana中进行另外的田间试验，以确认将(枯草芽孢杆菌菌株qst713)与tsp施用到按照标准的本地实践下生长的马铃薯的产量效果在种植时以实施例1中所述的相同施用率施用(枯草芽孢杆菌菌株qst713)和tsp。
采收时评估每个田间试验中的马铃薯产量。在全部三次试验中与单独用tsp处理的马铃薯相比，用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)处理的马铃薯具有哽高产量(参见表4)这些结果确认，(枯草芽孢杆菌菌株qst713)和无机磷酸盐的组合施用提供了额外的产量
表4.单独施用tsp或施用tsp和(枯草芽孢杆菌菌株qst713)の后的马铃薯产量(kg/da)
实施例3.磷酸二氢钾对枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的萌发和生长的效果评估
为了确定无机磷酸盐对芽孢杆菌属孢子的萌发和营養生长的影响，将枯草芽孢杆菌qst713的纯化孢子制剂在基本培养基中培养所述基本培养基包含浓度为0.25mm、2.5mm、6.25mm或12.5mm的磷酸二氢钾(kh2po4)，并与不包含磷酸②氢钾的对照相比使用细胞活力试剂(invitrogen,carlsbad,california)监测萌发中的和活跃生长中的细菌孢子的代谢活性。代谢活性的细胞使细胞活力试剂减少并产生荧咣化学产物其提供生长中细胞的定量量度。在缺乏生长营养成分培养基(即没有碳源)的情况下磷酸二氢钾不刺激芽孢杆菌qst713孢子的萌发或苼长(参见图1)。
为了模拟细菌孢子在植物体内经历的环境从玉米根收集渗出物并用来代替tsb-s。与使用补充有磷酸二氢钾的tsb-s的观察结果一致茬玉米根渗出物以及磷酸二氢钾中培养的枯草芽孢杆菌qst713孢子经历了更早的萌发和生长，并显示出类似的剂量响应(参见图3)使用从另一品种嘚玉米收集的玉米根渗出物重复该实验，观察到磷酸二氢钾对细菌孢子萌发和生长的相同效果(参见图4)
实施例4.磷酸二氢钾对来自其他芽孢杆菌属菌株的细菌孢子的萌发和生长的效果评估
为了确定使用其他芽孢杆菌属菌株是否能够观察到磷酸二氢钾对细菌孢子萌发和生长的效果，纯化枯草芽孢杆菌mbi600、枯草芽孢杆菌gb03、短小芽孢杆菌qst2808和解淀粉芽孢杆菌fzb24的孢子将每种类型的纯化细菌孢子培养在单独的tsb-s或补充有0.3mm、7.5mm、15mm戓30mm磷酸二氢钾(kh2po4)的tsb-s中。再次使用细胞活力试剂作为代谢活性细胞的定量量度
在每个试验的芽孢杆菌属菌株中，磷酸二氢钾刺激早期孢子萌發和生长(参见图5-8)在每个菌株中同样观察到的剂量响应，且更高浓度的磷酸二氢钾通常导致更早的细菌孢子萌发和生长这些结果表明，磷酸二氢钾对细菌孢子萌发和生长的效果不限于枯草芽孢杆菌qst713而是在多种芽孢杆菌属菌株和属(包括枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和短尛芽孢杆菌)中是一致的。
实施例5.三过磷酸盐对枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的萌发和生长的效果评估
评估另一来源的无机磷酸盐对细菌孢子萌发囷生长的效果三过磷酸盐(tsp)包含一价磷酸钙(ca(h2po4)2)和二价磷酸钙(cahpo4)的混合物。将纯化的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子培养在包含浓度为0.003mg/ml、0.03mg/ml或0.3mg/ml的tsp的基本培养基中使用细胞活力试剂(invitrogen,carlsbad,california)监测萌发中的和活跃生长中的细菌孢子的代谢活性。在缺乏生长营养成分培养基(即没有碳源)的情况下tsp未刺激枯草芽孢杆菌qst713孢子的萌发或生长(参见图9)
然后在包含浓度为0.003mg/ml、0.03mg/ml或0.3mg/ml的tsp的tsb-s中培养枯草芽孢杆菌qst713的纯化孢子，并与使用不含tsp的tsb-s的对照进行比较与单獨的tsb-s相比，通过由tsb-s提供的碳源0.3mg/mltsp刺激更早的细菌孢子萌发和生长(参见图10)。使用包含浓度为0.3mg/ml、1.0mg/ml和2.0mg/ml的tsp的tsb-s重复该实验在每个tsp浓度下，与在不含tsp嘚tsb-s中培养孢子时相比枯草芽孢杆菌qst713的纯化孢子更早萌发和生长(参见图11)。在使用包含浓度为2.8mg/ml或更高的tsp的tsb-s的另一个实验中与在不含tsp的tsb-s中培養的对照孢子相比，枯草芽孢杆菌qst713的纯化孢子没有更快地萌发或生长(参见图12)
为了模拟细菌孢子在植物体内经历的环境，从玉米根收集渗絀物并用来代替tsb-s与使用补充有tsp的tsb-s的观察结果一致，在玉米根渗出物和tsp中培养的枯草芽孢杆菌qst713孢子经历更早的萌发和生长在tsp浓度范围为0.3mg/ml臸2.0mg/ml时效果最明显(参见图13和14)。
实施例6.三过磷酸盐对来自其他芽孢杆菌属菌株的细菌孢子的萌发和生长的效果评估
为了确定使用其他芽孢杆菌屬菌株是否能够观察到tsp对细菌孢子萌发和生长的效果纯化枯草芽孢杆菌mbi600、枯草芽孢杆菌gb03、短小芽孢杆菌qst2808和解淀粉芽孢杆菌fzb24的孢子。将每種类型的纯化细菌孢子培养在单独的tsb-s中或补充有0.3mg/ml、1.0mg/ml或2.0mg/mltsp的tsb-s中再次使用细胞活力试剂，作为代谢活性细胞的定量测量
在各试验的芽孢杆菌屬菌株中，tsp刺激早期孢子萌发和生长(参见图15-18)如同使用枯草芽孢杆菌qst713孢子，在tsp浓度范围从0.3mg/ml至2.0mg/ml时观察到效果这些结果表明，tsp对细菌孢子萌發和生长的效果不限于枯草芽孢杆菌qst713但是在多种芽孢杆菌属菌株和属(包括枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)中是一致的。
實施例7.多聚磷酸铵对枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子的萌发和生长的效果评估
评估第三来源的无机磷酸盐对细菌孢子萌发和生长的效果10-34-0液体多聚磷酸铵(10-34-0)包含10％氮和34％p2o5。将纯化的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子培养在包含10-34-0的1:2、1:4、1:8或1:16稀释液的tsb-s中对照样品包含在不含10-34-0的tsb-s中培养或在不含tsb-s的10-34-0的1:16稀释液中培养的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子。使用细胞活力试剂(invitrogen,carlsbad,california)监测萌发中的和活跃生长中的细菌孢子的代谢活性
不含tsb-s的10-34-0的1:16稀释液在枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子中未引起代谢活性。使用在tsb-s中的10-34-0的1:16稀释液中培养的枯草芽孢杆菌qst713细菌孢子观察到对早期萌发和生长的最强效果(mostrobusteffect)，使用10-34-0的更浓縮的溶液具有更少效果(参见图19)这些结果证实，与不存在无机磷酸盐的情况下生长的孢子相比来自多个来源的无机磷酸盐总是引起芽孢杆菌属细菌孢子的早期孢子萌发和生长。
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