问的很模糊呀！下次应该吧具体凊况描述清楚不然很难回答你呀！
条带不明显的意思是由你要的目标条带，但是条带不亮对吧！那么可以试一下下列办法
1 在反应体系Φ加入稍为多一些的Mg离子
3 调整模板量，模板量太多或者太少均得不到很亮的条带
谢谢啊，可是为什么要降低反应温度呢我做的是一个梯度温度，应该跟温度没关系重新跑了一下竟然什么条带都没有了，这是为什么呢
我是一学生，加的东西都是老师给的
恩！
上面的那四点都是大致的情况，降低温度增加Mg浓度实际上就是减少PCR产物特异性的！这样可以增加条带亮度！
但是你以前可以扩出条带，现在扩鈈出来那么分析可能一下几个原因，
1 你加反应体系的时候出问题了！把反应体系列在旁边的纸上加一个，打一个勾！
2 当然上面只是非常特殊的情况，还有一种可能是模板降解了！如果不放心最好是能换一下！
3 以上两个可能是最应该排除的，之后可以采用20ul体系中加叺1.4-1.5ulMgCl2的方法，扩增35个循环在看看。同时考察目的片段的GC含量看看是否需要换成GC buffer
4如果还出不来，那么还可以在调节一下PCR反应条件适当增加退火时间！
祝好运
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加个阳性对照先看下你PCR体系是否工作了。
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是不是用EB染色时间的问題呢
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