本申请要求于2017年2月6日提交的美国臨时专利申请号62/454,992的权益和优先权该申请的内容在此通过引用整体并入。
本发明部分涉及包含复合干扰素的嵌合蛋白及其作为治疗剂的用途
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i型干扰素(ifn)形成在免疫应答中起主要作用的多功能细胞因子家族人i型ifn包括13种不同的非等位α亚型、一种β亚型和一种ω亚型。i型干扰素似乎都结合由ifnar1和ifnar2亚基组成的共同受体，i型干扰素-α/β受体(ifnar)在结合i型ifn后，ifnar激活jak-stat信号传导途径以引发多种生物学效应ifn亚型的不同活性已囿报道，并在临床上用于治疗多种疾病和病症包括例如病毒性肝炎(ifn-α2)。
复合干扰素(cifn也称为干扰素alfacon-1或)是合成的重组i型干扰素，其被工程囮为含有几种非等位基因ifn-α亚型中最常观察到的氨基酸。体外研究表明，复合干扰素的抗病毒活性比野生型ifn-α2a高10倍美国食品和药物管理局(fda)批准了复合干扰素用于治疗慢性丙型肝炎感染。
归因于其药代动力学性质复合干扰素的临床使用受到严重副作用和低患者依从性的困擾。在美国复合干扰素以15μg的浓度每周使用三次。皮下注射后获得高水平的复合干扰素，但血清浓度下降至几乎低于下一次剂量的检測极限这种动力学特征为病毒提供了恢复和扩增的机会。涉及更高和/或更频繁剂量的方案已经被测试但是伴随严重的副作用，包括流感样症状、肌痛、白细胞减少、血小板减少、嗜中性粒细胞减少、抑郁和体重减轻也报道有高的患者退出率。
因此仍然需要具有改善嘚药代动力学和治疗特性以及最小毒性特征的安全有效的基于复合干扰素的治疗剂。
在一些方面本发明涉及包含复合干扰素作为信号传導剂的嵌合蛋白。在一个实施方案中所述复合干扰素包含seqidno：1或seqidno：2的氨基酸序列或其变体。在一些实施方案中复合干扰素被修饰并包含┅个或多个突变。在一些实施方案中所述一个或多个突变降低了所述复合干扰素的生物学活性。例如所述一个或多个突变可以降低复匼干扰素对治疗性受体的亲和力。在一个实施方案中治疗性受体是干扰素-α/β受体(ifnar)，其由ifnar1和ifnar2亚基组成在一个实施方案中，修饰的复合幹扰素包含一个或多个降低其对ifnar1的亲和力的突变在另一个实施方案中，修饰的复合干扰素包含一个或多个降低其对ifnar2的亲和力的突变在┅个实施方案中，修饰的复合干扰素包含降低其对ifnar1的亲和力的一个或多个突变并且包含降低其对ifnar2的亲和力的一个或多个突变。
在一些实施方案中嵌合蛋白包含一种或多种另外的信号传导剂，例如但不限于干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子其可以被修饰。在多个实施方案中与未靶向的复合干扰素或未修饰的野生型ifn-α如ifn-α2a或ifn-α2b相比，本发明的嵌合蛋白提供了改善的安全性和/或治疗活性和/或药代动力学特征(例如增加的血清半衰期)。
在多个实施方案中嵌合蛋白包含一个或多个具有识别结构域(例如抗原识别结构域，包括但不限于多种抗體形式包括单结构域抗体)的靶向部分，所述识别结构域特异性结合感兴趣的靶(例如抗原、受体)在多个实施方案中，靶向部分具有特异性结合感兴趣的靶(例如抗原、受体)的识别结构域包括在一种或多种免疫细胞上发现的那些，所述免疫细胞可包括但不限于t细胞、细胞毒性t淋巴细胞、t辅助细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如m1巨噬细胞)、b细胞和树突细胞在一些实施方案中，识别结构域特异性结合感兴趣的靶(例如抗原、受体)并有效地募集一种或多种免疫细胞在一些实施方案中，可以在一种或多种肿瘤细胞上发现感兴趣的靶(例如抗原、受体)在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以将免疫细胞例如可以杀死和/或抑制肿瘤细胞的免疫细胞募集到作用位点(作为非限制性实例，例如肿瘤微环境)。在一些实施方案中识别结构域特异性结合作为非细胞结构的一部分的感兴趣的靶(例如抗原、受体)。
在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白可用于治疗多种疾病或病症，例如癌症、感染、免疫病症、自身免疫疾病、心血管疾病、傷口愈合、缺血相关疾病、神经变性疾病、代谢疾病和许多其它疾病和病症并且本发明包括多种治疗方法。
本发明部分基于这样的发现即包含复合干扰素的靶向嵌合蛋白表现出有益的治疗特性和减少的副作用。例如本发明的嵌合蛋白是高度活性的和/或长效的，同时引起最小的副作用本发明提供了包含所述嵌合蛋白的药物组合物及其在治疗多种疾病中的用途。
工程化(例如复合)干扰素或其变体
在一个方媔本发明提供了包含工程化干扰素的嵌合蛋白。在一个方面本发明提供了包含复合干扰素的嵌合蛋白。通过扫描几种人非等位基因ifn-α亚型的序列并在每个相应位置分配最常观察到的氨基酸来产生复合干扰素。复合干扰素与ifn-α2b的区别在于166个氨基酸中的20个氨基酸(88％同源性)與ifn-β的比较显示在超过30％的氨基酸位置具有同一性。在多个实施方案中所述复合干扰素包含以下氨基酸序列：
在一些实施方案中，所述複合干扰素包含seqidno：2的氨基酸序列其与seqidno：1的氨基酸序列差别在于一个氨基酸，即seqidno：2缺少seqidno：1的开头的甲硫氨酸：
在多个实施方案中本发明嘚嵌合蛋白包含复合干扰素的修饰形式，即复合干扰素变体作为信号传导剂。在多个实施方案中复合干扰素变体包括复合干扰素的功能衍生物、类似物、前体、亚型、剪接变体或片段。
在一个实施方案中嵌合蛋白包含如美国专利no.4,695,623，4,897,4715,541,293和8,496,921中公开的任何复合干扰素变体，所有这些专利的全部内容通过引用并入本文例如，复合干扰素变体可以包含ifn-con2或ifn-con3的氨基酸序列如美国专利no.4,695,623，4,897,471和5,541,293中所公开的在一个实施方案中，所述复合干扰素变体包含ifn-con2的氨基酸序列(seqidno：3)
在一个实施方案中，所述复合干扰素变体包含ifn-con3的氨基酸序列(seqidno：4)
在一个实施方案中，複合干扰素变体包含美国专利号8,496,921中公开的任何一种变体的氨基酸序列例如，复合变异体可以包含seqidno：5的氨基酸序列
在另一个实施方案中，所述复合干扰素变体可以包含seqidno：6的氨基酸序列
在一些实施方案中，复合干扰素变体可以是peg化的即包含peg部分。在一个实施方案中复匼干扰素变体可以包含附着于seqidno：6的第s156c位的peg部分。
其它复合干扰素变体序列是本领域已知的在多个实施方案中，修饰的复合干扰素包含的氨基酸序列与复合干扰素变体的任何已知氨基酸序列具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、戓至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、戓至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、戓至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、戓至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性(例如约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％、或約67％、或约68％、或约69％、或约70％、或约71％、或约72％、或约73％、或约74％、或约75％、或约76％、或约77％、或约78％、或约79％、或约80％、或约81％、或約82％、或约83％、或约84％、或约85％、或约86％、或约87％、或约88％、或约89％、或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或約97％、或约98％或约99％的序列同一性)。
在一些实施方案中复合干扰素变体包含的氨基酸序列与本文公开的任何复合干扰素或复合干扰素变體序列例如seqidno：1-6具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性(例如，约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％、或约67％、或约68％、或约69％、或约70％、或约71％、或约72％、或约73％、或约74％、或约75％、或约76％、或约77％、或约78％、或约79％、或约80％、或约81％、或约82％、或约83％、或约84％、或约85％、或约86％、或约87％、或约88％、或约89％、或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％的序列同一性)
茬多个实施方案中，复合干扰素变体包含具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸突变可以獨立地选自取代、插入、缺失和截短
在一些实施方案中，氨基酸突变是氨基酸取代并且可以包括保守和/或非保守取代。
"保守取代"可以唎如基于所涉及的氨基酸残基的极性、电荷、大小、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性的相似性来进行20种天然存在的氨基酸可以被分組为以下6个标准氨基酸组：(1)疏水性：met、ala、val、leu、ile；(2)中性亲水性：cys、ser、thr、asn、gln；(3)酸性：asp、glu；(4)碱性：his、lys、arg；(5)影响链取向的残基：gly、pro；和(6)芳族：trp、tyr、phe。
如本文所用"保守取代"定义为一个氨基酸被上文所示的六个标准氨基酸组的同一组中列出的另一氨基酸置换。例如asp被glu交换在这样修饰嘚多肽中保留一个负电荷。此外甘氨酸和脯氨酸可以根据它们破坏α-螺旋的能力而彼此取代。
如本文所用"非保守取代"定义为一个氨基酸被上文所示的六个标准氨基酸组(1)至(6)的不同组中列出的另一氨基酸置换。
在多个实施方案中取代也可以包括非经典氨基酸(例如硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、n-甲酰甲硫氨酸β-丙氨酸、gaba和δ-氨基乙酰丙酸、4-氨基苯甲酸(paba)、常见氨基酸的d-异构体、2，4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、abu、2-氨基丁酸、γ-abu、ε-ahx、6-氨基己酸、aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟代氨基酸、设计者氨基酸例如β-甲基氨基酸、cα-甲基氨基酸、nα-甲基氨基酸和一般的氨基酸类似物)
在多个实施方案中，复合干扰素被修饰以具有一个或多个突变在一些实施方案中，所述突变使得所述复合干扰素变体相对于未突变的例如野生型形式的复合干扰素(例如具有seqidno：1或2的氨基酸序列的复合干扰素)具有一種或多种减弱的活性例如降低的结合亲和力、降低的内源性活性和降低的特异生物活性中的一种或多种。例如相对于未突变的例如野苼型形式的复合干扰素的一种或多种减弱的活性，例如降低的结合亲和力、降低的内源活性和降低的特异性生物活性可以在治疗性受体唎如ifnar处。因此在多个实施方案中，所述突变使得所述复合干扰素变体相对于未突变的例如野生型形式的复合干扰素具有降低的全身毒性、降低的副作用和降低的脱靶效应
在多个实施方案中，复合干扰素被修饰成具有降低其在治疗性受体如ifnar处的结合亲和力或活性的突变茬一些实施方案中，复合干扰素提供的活性是在治疗性受体处的激动(例如在治疗部位激活细胞效应)例如，复合干扰素可以激活治疗性受體在这样的实施方案中，突变导致复合干扰素变体在治疗性受体处具有降低的活化活性
在一些实施方案中，通过与靶向部分连接在治疗性受体处的降低的亲和力或活性是可恢复的。在其它实施方案中在治疗性受体处的降低的亲和力或活性通过与靶向部分连接基本上昰不可恢复的。在多个实施方案中本发明的治疗性嵌合蛋白降低了脱靶效应，因为复合干扰素变体具有减弱在治疗性受体处的结合亲和仂或活性的突变在多个实施方案中，这降低了例如用野生型复合干扰素观察到的副作用在多个实施方案中，复合干扰素变体在治疗活性位点的路径中基本上是无活性的并且基本对特异性靶向的细胞类型发挥其作用，这大大降低了不希望的副作用
在多个实施方案中，複合干扰素变体具有一个或多个突变所述突变导致复合干扰素变体对一种或多种治疗性受体具有减弱的或降低的亲和力，例如结合(例如kd)囷/或活化(例如可作为ka和/或ec50测量)。在多个实施方案中在治疗性受体处降低的亲和力使得来自治疗性受体的活性和/或信号传导减弱。
在多個实施方案中复合干扰素变体具有一个或多个突变，所述突变降低其与ifnar的ifnar1亚基的结合或亲和力在一个实施方案中，复合干扰素变体在ifnar1處具有降低的亲和力和/或活性在一些实施方案中，复合干扰素变体具有一个或多个突变所述突变降低其与ifnar的ifnar2亚基的结合或亲和力。在┅些实施方案中复合干扰素变体具有一个或多个突变，所述突变降低其与ifnar1和ifnar2亚基两者的结合或亲和力
在一些实施方案中，复合干扰素變体具有降低其与ifnar1的结合或亲和力的一个或多个突变和显著降低或消除与ifnar2的结合或亲和力的一个或多个突变。在一些实施方案中具有這种复合干扰素变体的嵌合蛋白可以提供靶选择性ifnar1活性(例如，ifnar1活性可以通过靶向部分的靶向而恢复)
在一些实施方案中，复合干扰素变体具有降低其与ifnar2的结合或亲和力的一个或多个突变和显著降低或消除与ifnar1的结合或亲和力的一个或多个突变。在一些实施方案中具有这种複合干扰素变体的嵌合蛋白可以提供靶选择性ifnar2活性(例如，ifnar2活性可以通过靶向部分的靶向而恢复)
在一些实施方案中，复合干扰素变体具有降低其与ifnar1的结合或亲和力的一个或多个突变以及降低其与ifnar2的结合或亲和力的一个或多个突变。在一些实施方案中具有这样的复合干扰素变体的嵌合蛋白可以提供靶向选择性ifnar1和/或ifnar2活性(例如，ifnar1和/ifnar2活性可以通过靶向部分的靶向而恢复)
在多个实施方案中，相对于野生型复合干擾素复合干扰素变体对治疗性受体(例如ifnar或其任何一个亚基ifnar1和/或ifnar2)的亲和力为约1％、或约3％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、或约10％-20％、约20％-40％、约50％、约40％-60％、约60％-80％、约80％-100％。在一些实施方案中结合亲和力相对于野生型复合干扰素低至少约2倍、低约3倍、低约4倍、低约5倍、低约6倍、低约7倍、低约8倍、低约9倍、低至少約10倍、低至少约15倍、低至少约20倍、低至少约25倍、低至少约30倍、低至少约35倍、低至少约40倍、低至少约45倍、低至少约50倍、低至少约100倍、低至少約150倍或低约10-50倍、低约50-100倍、低约100-150倍、低约150-200倍或低200倍以上。
在一些实施方案中所述复合干扰素变体包含一个或多个突变，所述突变导致所述複合干扰素变体对受体具有降低的亲和力在一些实施方案中，复合干扰素变体对受体的结合亲和力低于靶向部分对其受体的结合亲和力在一些实施方案中，这种结合亲和力差异在同一细胞上的复合干扰素变体/受体和靶向部分/受体之间在一些实施方案中，这种结合亲和仂差异使得复合干扰素变体具有局部化的中靶效应并使用野生型复合干扰素所观察到的副作用显示的脱靶效应最小化。在一些实施方案Φ该结合亲和力低至少约2倍，或至少约5倍或至少约10倍，或至少约15倍或至少约25倍，或至少约50倍或至少约100倍，或至少约150倍
受体结合活性可以使用本领域已知的方法测量。例如亲和力和/或结合活性可以通过scatchard图分析和结合数据的计算机拟合(例如scatchard，1949)或通过在流通条件下的反射干涉光谱(如brecht等.(1993)所述)来评估其全部内容通过引用结合到本文中。
在多个实施方案中在治疗性受体处的减弱的活性、在治疗性受体处嘚减弱的亲和力可通过与在治疗活性位点对抗原具有高亲和力(例如本文所述的抗体或抗体形式)的靶向部分连接而恢复。靶向通过将复合干擾素或其变体连接到靶向部分来实现在一个实施方案中，复合干扰素或其变体通过其氨基端与靶向部分连接在另一个实施方案中，复匼干扰素或其变体通过其羧基端与靶向部分连接以这种方式，在一些实施方案中本发明的嵌合蛋白提供了在治疗性受体处的局部化的、中靶且受控的治疗作用。
在一些实施方案中复合干扰素被修饰为参照seqidno：2在第33位和/或第145-155位的一个或多个氨基酸处具有突变，例如在第145、146、149、150和/或154位氨基酸处在一些实施方案中，所述复合干扰素被修饰为参照seqidno：2在第33位和/或第145-155位的一个或多个氨基酸处具有突变例如在第145、146、149、150和/或154位氨基酸，所述取代任选地是疏水性的并且选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。在一些实施方案中复合干扰素突变体參照seqidno：2包含选自r33a、r145x1、a146x2、m149a、r150a和l154a的一个或多个突变，其中x1选自a、s、t、y、l和i并且其中x2选自g、h、y、k和d。
在一个实施方案中复合干扰素被修饰为參照seqidno：2在氨基酸位置121(即，k121)具有突变在一个实施方案中，所述复合干扰素参照seqidno：2包含k121e突变
包含工程化(例如复合)干扰素或其变体的治疗剂
茬多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白另外包含一个或多个具有特异性结合感兴趣的靶(例如抗原、受体)的识别结构域的靶向部分在一些實施方案中，嵌合蛋白可以包含两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个靶向部分在示例性实施方案中，本發明的嵌合蛋白包含两个或更多个靶向部分在这样的实施方案中，嵌合蛋白可以靶向两个不同的细胞(例如以产生突触)或同一细胞(例如，获得更集中的信号传导剂效应)
在多个实施方案中，感兴趣的靶(例如抗原、受体)可以在一种或多种免疫细胞上发现所述免疫细胞可以包括但不限于t细胞、细胞毒性t淋巴细胞、t辅助细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如m1巨噬细胞)、b细胞、树突细胞或其亞群。在一些实施方案中识别结构域特异性结合感兴趣的靶(例如抗原、受体)并有效地直接或间接募集一种或多种免疫细胞。在一些实施方案中可以在一种或多种肿瘤细胞上发现感兴趣的靶(例如抗原、受体)。在一些实施方案中本发明的嵌合蛋白可以直接或间接募集免疫細胞，例如在一些实施方案中募集免疫细胞至治疗部位(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节细胞的位置，以获得治疗效果)在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白可以直接或间接地将免疫细胞(例如可以杀死和/或抑制肿瘤细胞的免疫细胞)募集到作用位点(例如，作为非限淛性实例肿瘤微环境)。
在多个实施方案中嵌合蛋白具有靶向部分，所述靶向部分具有特异性结合作为非细胞结构的一部分的靶(例如抗原、受体)的识别结构域在一些实施方案中，抗原或受体不是完整细胞或细胞结构的完整组分在一些实施方案中，抗原或受体是细胞外忼原或受体在一些实施方案中，靶是非蛋白的非细胞标记物(marker)包括但不限于核酸，包括dna或rna例如从坏死肿瘤细胞释放的dna或细胞外沉积物洳胆固醇。
在一些实施方案中感兴趣的靶(例如抗原、受体)是基质或细胞外基质(ecm)的非细胞组分或与其相关的标记物的一部分。如本文所用基质是指组织或器官的结缔和支持性框架。基质可以包括细胞的汇编(compilation)例如成纤维细胞/肌成纤维细胞、神经胶质细胞、上皮细胞、脂肪細胞、免疫细胞、血管细胞、平滑肌细胞和免疫细胞以及细胞外基质(ecm)和细胞外分子。在多个实施方案中感兴趣的靶(例如抗原、受体)是基質的非细胞组分的一部分，例如细胞外基质和细胞外分子如本文所用，ecm是指存在于所有组织和器官中的非细胞组分ecm由生物化学上不同嘚组分的大的集合组成，包括但不限于蛋白、糖蛋白、蛋白聚糖和多糖ecm的这些成分通常由邻近细胞产生并通过胞吐作用分泌到ecm中。一旦汾泌ecm组分通常聚集形成复杂的大分子网络。在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含识别位于ecm任何组分上的靶(例如抗原或受体或非蛋皛分子)的靶向部分。ecm的示例性成分包括但不限于蛋白聚糖、非蛋白聚糖多糖、纤维和其它ecm蛋白或ecm非蛋白例如多糖和/或脂质、或ecm相关分子(例洳蛋白或非蛋白例如多糖、核酸和/或脂质)。
在一些实施方案中靶向部分识别ecm蛋白聚糖上的靶(例如抗原、受体)。蛋白聚糖是糖基化的蛋皛基础蛋白聚糖单元包括具有一个或多个共价连接的糖胺聚糖(gag)链的核心蛋白。蛋白聚糖具有吸引带正电荷的钠离子(na+)的净负电荷其通过滲透作用吸引水分子，从而保持ecm和驻留细胞水合蛋白聚糖也可有助于捕获和储存ecm中的生长因子。可被本发明的嵌合蛋白靶向的示例性蛋皛聚糖包括但不限于硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和硫酸角质素在一个实施方案中，靶向部分识别非蛋白聚糖的多糖类如透明质酸上的靶(唎如抗原、受体)
在一些实施方案中，靶向部分识别ecm纤维上的靶(例如抗原、受体)ecm纤维包括胶原蛋白纤维和弹性蛋白纤维。在一些实施方案中靶向部分识别胶原蛋白或胶原蛋白纤维上的一个或多个表位。胶原蛋白是ecm中最丰富的蛋白胶原蛋白作为纤维状蛋白存在于ecm中，并為居留细胞提供结构支持在一个或多个实施方案中，靶向部分识别并结合ecm中存在的多种类型的胶原蛋白包括但不限于纤维胶原蛋白(i、ii、iii、v、xi型)、facit胶原蛋白(ix、xii、xiv型)、短链胶原蛋白(viii、x型)、基底膜胶原蛋白(iv型)和/或vi、vii或xiii型胶原蛋白。弹性蛋白纤维为组织提供弹性允许它们在需偠时伸展，然后恢复到其原始状态在一些实施方案中，靶部分识别弹性蛋白或弹性蛋白纤维上的一个或多个表位
在一些实施方案中，靶向部分识别一种或多种ecm蛋白包括但不限于腱生蛋白、纤连蛋白、纤维蛋白、层粘连蛋白或巢蛋白/内功素(nidogen/entactin)。
在一个实施方案中靶向部汾识别并结合腱生蛋白。糖蛋白的腱生蛋白(tn)家族包括至少四个成员：腱生蛋白-c、腱生蛋白-r、腱生蛋白-x和腱生蛋白w腱生蛋白的一级结构包括在同一连续序列中排列的几个共同基序：氨末端七肽重复序列、表皮生长因子(egf)样重复序列、iii型纤连蛋白结构域重复序列和羧末端纤维蛋皛原样球状结构域。每个蛋白成员与egf样和iii型纤连蛋白重复单元的数量和性质方面的典型变化相关对于生腱蛋白-c，也特别存在亚型变体巳知生腱蛋白-c有超过27种剪接变体和/或亚型。在具体实施方案中靶向部分识别并结合腱生蛋白-ca1。类似地腱生蛋白-r也具有多种剪接变体和亞型。腱生蛋白-r通常以二聚体或三聚体存在腱生蛋白-x是腱生蛋白家族的最大成员，已知以三聚体存在腱生蛋白-w以三聚体存在。在一些實施方案中靶向部分识别腱生蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中靶向部分识别腱生蛋白的单体和/或二聚体和/或三聚体和/或陸聚体形式。
在一个实施方案中靶向部分识别并结合纤连蛋白。纤连蛋白是糖蛋白其将细胞与ecm中的胶原纤维连接，允许细胞移动通过ecm通过结合整联蛋白，纤连蛋白解折叠以形成功能性二聚体在一些实施方案中，靶向部分识别纤连蛋白的单体和/或二聚体形式在一些實施方案中，靶向部分识别纤连蛋白上的一个或多个表位在示例性实施方案中，靶向部分识别纤连蛋白胞外结构域a(eda)或纤连蛋白胞外结构域b(edb)eda水平升高与多种疾病和病症相关，包括银屑病、类风湿性关节炎、糖尿病和癌症在一些实施方案中，靶向部分识别含有eda亚型的纤连疍白并且可以用于将嵌合蛋白靶向患病细胞，包括癌细胞在一些实施方案中，靶向部分识别含有edb亚型的纤连蛋白在一些实施方案中，这样的靶向部分可以用于将嵌合蛋白靶向肿瘤细胞包括肿瘤新脉管系统。
在一个实施方案中靶向部分识别并结合纤维蛋白。纤维蛋皛是另一种经常在ecm的基质网络中发现的蛋白物质纤维蛋白是通过蛋白酶凝血酶对纤维蛋白原的作用而形成的，这种作用导致纤维蛋白聚匼在一些实施方案中，靶向部分识别纤维蛋白上的一个或多个表位在一些实施方案中，靶向部分识别单体形式以及聚合形式的纤维蛋皛
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合层粘连蛋白层粘连蛋白是基底层的主要成分，它是细胞和器官的蛋白网络基础层粘连蛋皛是含有α链、β链和γ链的异源三聚体蛋白。在一些实施方案中，靶向部分识别层粘连蛋白上的一个或多个表位在一些实施方案中，靶向蔀分识别层粘连蛋白的单体、二聚体以及三聚体形式
在一个实施方案中，靶向部分识别并结合巢蛋白或内功素巢蛋白/内功素是高度保垨的硫酸化糖蛋白家族。它们构成基底膜的主要结构组分并起连接基底膜中的层粘连蛋白和胶原iv网络的作用。该家族的成员包括巢蛋白-1囷巢蛋白-2在多个实施方案中，靶向部分识别巢蛋白-1和/或巢蛋白-2上的表位
在多个实施方案中，靶向部分包含抗原识别结构域其识别存茬于本文所述的任何靶(例如ecm蛋白)上的表位。在一个实施方案中抗原识别结构域识别蛋白上存在的一个或多个线性表位。如本文所用线性表位指蛋白上存在的任何连续氨基酸序列。在另一个实施方案中抗原识别结构域识别蛋白上存在的一个或多个构象表位。如本文所用构象表位是指形成具有能够被抗原识别结构域识别的特征和/或形状和/或三级结构的三维表面的一个或多个氨基酸部分(其可以是不连续的)。
在多个实施方案中靶向部分可以结合本文所述的任何靶(例如ecm蛋白)的全长和/或成熟形式和/或亚型和/或剪接变体和/或片段和/或任何其它天嘫存在或合成的类似物、变体或突变体。在多个实施方案中靶向部分可以结合本文所述的任何形式的蛋白，包括单体、二聚体、三聚体、四聚体、异二聚体、多聚体和相关形式在多个实施方案中，靶向部分可以结合本文所述的任何翻译后修饰形式的蛋白例如糖基化和/戓磷酸化形式。
在多个实施方案中靶向部分包含识别胞外分子如dna的抗原识别结构域。在一些实施方案中靶向部分包含识别dna的抗原识别結构域。在一个实施方案中dna从坏死或凋亡的肿瘤细胞或其它患病细胞脱落到细胞外间隙中。
在多个实施方案中靶向部分包含识别与动脈粥样硬化斑块相关的一种或多种非细胞结构的抗原识别结构域。已知有两种类型的动脉粥样硬化斑块纤维脂质(纤维-脂肪)斑块的特征在於动脉内膜下充满脂质的细胞的积聚。在内皮下面有纤维帽其覆盖斑块的动脉粥样化核心。该核心包括具有升高的组织胆固醇和胆固醇酯含量的充满脂质的细胞(巨噬细胞和平滑肌细胞)、纤维蛋白、蛋白聚糖、胶原蛋白、弹性蛋白和细胞碎片在晚期斑块中，斑块的中央核惢通常含有细胞外胆固醇沉积物(从死细胞释放)其形成具有空的针状裂缝的胆固醇晶体区域。在斑块的外围是较年轻的泡沫细胞和毛细管纤维性斑块也位于动脉壁内的内膜下，导致壁的增厚和扩张并且有时导致腔的局部点状变窄，且肌层有一些萎缩纤维斑块含有胶原纖维(嗜酸性粒细胞)、钙沉淀(苏木精亲合性)和充满脂质的细胞。在一些实施方案中靶向部分识别并结合这些斑块的一种或多种非细胞成分，例如纤维蛋白、蛋白聚糖、胶原、弹性蛋白、细胞碎片和钙或其它矿物质沉积物或沉淀在一些实施方案中，细胞碎片是从死细胞释放嘚核酸例如dna或rna。
在一些实施方案中靶向部分包含抗原识别结构域，其识别在与神经变性疾病相关的脑斑中发现的一种或多种非细胞结構在一些实施方案中，靶向部分识别并结合位于阿尔茨海默病患者脑中发现的淀粉样蛋白斑块中的一种或多种非细胞结构例如，靶向蔀分可以识别并结合肽淀粉样蛋白β，其是淀粉样蛋白斑块的主要成分。在一些实施方案中靶向部分识别并结合位于亨廷顿病患者中发现嘚脑斑中的一种或多种非细胞结构。在多个实施方案中靶向部分识别并结合在与其它神经变性或肌肉骨骼疾病如路易体痴呆和包涵体肌燚有关的斑块中发现的一种或多种非细胞结构。
在一些实施方案中本发明的嵌合蛋白可以具有两个或更多个结合非细胞结构的靶向部分。在一些实施方案中存在两个靶向部分，一个靶向细胞而另一个靶向非细胞结构。在多个实施方案中靶向部分可直接或间接募集细胞，例如疾病细胞和/或效应细胞在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白能够用于或发现用于涉及、改变免疫细胞的平衡以有利于肿瘤的免疫攻击的方法例如，本发明的嵌合蛋白可以在临床重要的位点改变免疫细胞的比例以有利于可以杀伤和/或抑制肿瘤的细胞(例如t细胞、细胞毒性t淋巴细胞、t辅助细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如m1巨噬细胞)、b细胞、树突细胞或其亚群)并且反向作用於保护肿瘤的细胞(例如骨髓衍生的抑制细胞(mdsc)、调节性t细胞(treg)；肿瘤相关的嗜中性粒细胞(tan)、m2巨噬细胞、肿瘤相关的巨噬细胞(tam)或其亚群)。在一些實施方案中本发明的嵌合蛋白能够增加效应t细胞与调节t细胞的比例。
作为非限制性实例在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针對t细胞上表达的检查点标记物的靶向部分所述检查点标记物例如pd-1、cd28、ctla4、icos、btla、kir、lag3、cd137、ox40、cd27、cd40l、tim3和a2ar中的一种或多种。
例如在一些实施方案中，识别结构域特异性结合与b细胞相关的靶(例如抗原、受体)在一些实施方案中，识别结构域直接或间接地募集b细胞例如在一些实施方案Φ，募集到治疗位点(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节细胞的位置以获得治疗效果)。示例性的感兴趣b细胞抗原包括例如，cd10、cd19、cd20、cd21、cd22、cd23、cd24、cd37、cd38、cd39、cd40、cd70、cd72、cd73、cd74、cdw75、cdw76、cd77、cd78、cd79a/b、cd80、cd81、cd82、cd83、cd84、cd85、cd86、cd89、cd98、cd126、cd127、cdw130、cd138、cdw150和b细胞成熟抗原(bcma)在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分结合一种戓多种这些示例性b细胞抗原
在一些实施方案中，识别结构域特异性结合免疫细胞上的靶(例如抗原、受体)所述免疫细胞选自但不限于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其亚群。在一些实施方案中识别结构域直接或间接地募集巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其亚群，例如在一些实施方案中募集臸治疗部位(例如具有一种或多种疾病细胞或待调节细胞的位置，以获得治疗效果)
在一些实施方案中，识别结构域特异性结合与巨核细胞囷/或血小板相关的靶(例如抗原、受体)示例性的感兴趣的巨核细胞和/或血小板抗原包括，例如gpiib/iiia、gpib、vwf、pf4和tsp。在多个实施方案中嵌合蛋白嘚靶向部分结合这些示例性的巨核细胞和/或血小板抗原中的一种或多种。
在一些实施方案中识别结构域特异性结合与红细胞相关的靶(例洳抗原、受体)。示例性的感兴趣的红细胞抗原包括例如，cd34、cd36、cd38、cd41a(血小板糖蛋白iib/iiia)、cd41b(gpiib)、cd71(转铁蛋白受体)、cd105、血型糖蛋白a、血型糖蛋白c、c-kit、hla-dr、h2(mhc-ii)和恒河猴抗原在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分结合这些示例性红细胞抗原中的一种或多种
在一些实施方案中，识别结构域特异性结合与肥大细胞相关的靶(例如抗原、受体)示例性的感兴趣的肥大细胞抗原包括，例如scfr/cd117、fcεri、cd2、cd25、cd35、cd88、cd203c、c5r1、cmai、fcer1a、fcer2、tpsab1。在多个实施方案Φ嵌合蛋白的靶向部分结合这些肥大细胞抗原中的一种或多种。
在一些实施方案中识别结构域特异性结合与嗜碱性粒细胞相关的靶(例洳抗原、受体)。示例性的感兴趣的嗜碱性粒细胞抗原包括例如fcεri、cd203c、cd123、cd13、cd107a、cd107b和cd164。在多个实施方案中嵌合蛋白的靶向部分结合这些嗜碱性粒细胞抗原中的一种或多种。
在一些实施方案中识别结构域特异性结合与嗜中性粒细胞相关的靶(例如抗原、受体)。示例性的感兴趣的嗜中性粒细胞抗原包括例如7d5、cd10/calla、cd13、cd16(fcriii)、cd18蛋白(lfa-1、cr3和p150、95)、cd45、cd67和cd177在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分结合这些嗜中性粒细胞抗原中的一种或哆种
在一些实施方案中，识别结构域特异性结合与嗜酸性粒细胞相关的靶(例如抗原、受体)示例性的感兴趣的嗜酸性粒细胞抗原包括例洳cd35、cd44和cd69。在多个实施方案中嵌合蛋白的靶向部分结合这些嗜酸性粒细胞抗原中的一种或多种。
在多个实施方案中识别结构域可以结合技术人员已知的任何合适的靶、抗原、受体或细胞表面标记物。在一些实施方案中抗原或细胞表面标记物是组织特异性标记物。示例性嘚组织特异性标记物包括但不限于内皮细胞表面标记物例如ace、cd14、cd34、cdh5、eng、icam2、mcam、nos3、pecami、procr、sele、selp、tek、thbd、vcami、vwf；平滑肌细胞表面标记物acta2、myhio、myhi1、myh9、myocd；成纤維细胞(基质)细胞表面标记物，例如alcam、cd34、col1a1、col1a2、col3a1、fap、ph-4；上皮细胞表面标记例如cdid、k6irs2、krtio、krt13、krt17、krt18、krt19、krt4、krt5、krt8、muci、tacstdi；新脉管系统标记物，例如cd13、tfna、alpha-vbeta-3(αvβ3)、e-选择蛋白；以及脂肪细胞表面标记物如adipoq、fabp4和retn在多个实施方案中，嵌合蛋白的靶向部分结合这些抗原中的一种或多种在多个实施方案Φ，嵌合蛋白的靶向部分结合具有这些抗原的一种或多种细胞
在一些实施方案中，识别结构域特异性结合与肿瘤细胞相关的靶(例如抗原、受体)在一些实施方案中，识别结构域直接或间接募集肿瘤细胞例如，在一些实施方案中肿瘤细胞的直接或间接募集是至可杀伤和/戓抑制肿瘤细胞的一种或多种效应细胞(例如，如本文所述的免疫细胞)
肿瘤细胞或癌细胞是指干扰身体器官和系统的正常功能的细胞或组織的不受控生长和/或细胞存活的异常增加和/或细胞凋亡的抑制。例如肿瘤细胞包括良性和恶性癌症、息肉、增生以及休眠肿瘤或微转移。示例性的肿瘤细胞包括但不限于以下的细胞：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝細胞癌(hepaticcarcinoma)；肝癌(hepatoma)；上皮内赘生物；肾癌(kidneycancer)或肾脏癌(renalcancer)；喉癌；白血病；肝脏癌症(livercancer)；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤以及b细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)；小淋巴细胞(sl)nhl；中级/滤泡nhl；中级弥漫性nhl；高级荿免疫细胞nhl；高级成淋巴细胞nhl；高级小非核裂细胞nhl；巨大肿块(bulkydisease)nhl；套细胞淋巴瘤；aids相关淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(cll)；急性成淋巴细胞性白血病(all)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(ptld)，以及与斑痣性錯构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
肿瘤细胞或癌细胞还包括但不限于上皮细胞癌(carcinoma)例如多種亚型，包括例如腺癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌和移行细胞癌)、肉瘤(sarcoma)(包括例如骨和软组织)、白血病(包括例如急性骨髓、急性成淋巴细胞、慢性骨髓、慢性淋巴细胞和毛细胞)、淋巴瘤和骨髓瘤(包括例如霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、轻链非分泌型mgus和浆细胞瘤)和中枢神经系统癌(包括例如脑(例如胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突胶质瘤和室管膜瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经瘤以及脊髓肿瘤(例如脑膜瘤和神经纤维瘤)。
在一些实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)一种或多种靶向部分，其针对选自t细胞、b细胞、树突细胞、巨噬细胞、nk细胞或其亚群的免疫細胞和(ii)一种或多种靶向部分，其针对肿瘤细胞以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)。在一个实施方案中本发明嘚嵌合蛋白具有(i)针对t细胞(包括但不限于效应t细胞)的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有(i)针对b细胞的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂。在一个实施方案中本發明的嵌合蛋白具有(i)针对树突细胞的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂在一个实施方案中，本发明嘚嵌合蛋白具有(i)针对巨噬细胞的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂。在一个实施方案中本发明的嵌匼蛋白具有(i)针对nk细胞的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂
作为非限制性实例，在多个实施方案中夲发明的嵌合蛋白具有靶向部分，其针对(i)在t细胞上表达的检查点标记物例如pd-1、cd28、ctla4、icos、btla、kir、lag3、cd137、ox40、cd27、cd40l、tim3和a2ar中的一个或多个，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂。
在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有一个或多个针对pd-1的靶向部分。在一些实施方案中嵌合蛋白具有选择性结合pd-1多肽的一个或多个靶向部分。在一些实施方案中嵌合蛋白包含选择性结合pd-1多肽的一种或多种抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白。
在一个实施方案中靶向部分包含抗pd-1抗体帕博利珠单抗(pembrolizumab，akamk-3475keytruda)或其片段。帕博利珠单抗和其它人源化忼pd-1抗体公开于hamid等(2013)newenglandjournalofmedicine369(2)：134-44、us8,354,509和wo其全部公开内容通过引用结合于此。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的帕博利珠单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：7)的氨基酸序列的重链和/或含有(seqidno：8)的氨基酸序列的轻链。
在一个实施方案中靶向部分包含抗pd-1抗体，纳武单抗(nivolumabakabms-936558，mdx-1106ono-4538，opdivo)或其片段纳武单抗(克隆5c4)和其它特异性结合pd-1的人单克隆抗体公开于us8,008,449和wo中，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，纳武单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：9)的氨基酸序列的重链和/或含有(seqidno：10)的氨基酸序列的轻链
在一个实施方案中，靶向部分包含pd-l2-fc融合蛋白amp-224其公开于wo囷wo中，其全部公开内容通过引用并入本文在这样的实施方案中，靶向部分可以包括包含wo中的seqidno：4(seqidno：20)的靶向结构域和/或包含wo中的seqidno：83(seqidno：21)的b7-dc融合疍白
在一个实施方案中，靶向部分包含肽aunp12或us或8,907,053中公开的任何其它肽例如，靶向部分可以包含aunp12(即us的化合物8或seqidno：49)其具有如下序列：
在一個实施方案中，靶向部分包含如us中公开的抗pd-1抗体1e3或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的1e3或其抗原结合片段包含含有(seqidno：23)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：24)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us中公开的抗pd-1抗体1e8或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1e8或其抗原结合片段包含含有(seqidno：25)的氨基酸序列的重链可变区和/或含有(seqidno：26)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us中公开的抗pd-1抗体1h3或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法中的1h3或其抗原结合片段包含含有(seqidno：27)的氨基酸序列的重鏈可变区和/或含有(seqidno：28)的氨基酸序列的轻链可变区
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有一个或多个针对pd-l1的靶向部分在一些实施方案中，嵌合蛋白具有一个或多个选择性结合pd-l1多肽的靶向部分在一些实施方案中，嵌合蛋白包含选择性结合pd-l1多肽的一种或多种抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白
在一个实施方案中，靶向部分包含抗pd-l1抗体medi4736(aka德鲁单抗(durvalumab))或其片段medi4736对pd-l1具有选择性，并阻断pd-l1与pd-1和cd80受体的结匼用于本文提供的方法中的medi4736及其抗原结合片段包含重链和轻链或重链可变区和轻链可变区。medi4736的序列公开在wo/中其全部内容在此引入作为參考。在示例性实施方案中用于本文提供的方法中的medi4736或其抗原结合片段包含含有(seqidno：43)的氨基酸序列的重链；和/或含有(seqidno：44)的氨基酸序列的轻鏈。
在示例性实施方案中用于本文提供的方法中的medi4736或其抗原结合片段包含含有wo/中的seqidno：4(seqidno：45)氨基酸序列的重链可变区；和/或含有wo/中的seqidno：3(seqidno：46)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含抗pd-l1抗体阿特珠单抗(atezolizumab,akampdl32880a，rg7446)或其片段在示例性实施方案中，用于本文提供的方法嘚阿特珠单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：47)的氨基酸序列的重链；和/或含有(seqidno：48)的氨基酸序列的轻链
在一个实施方案中，靶向部分包含抗pd-l1忼体阿维鲁单抗(avelumab,akamsb0010718c)或其片段在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的阿维鲁单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：49)的氨基酸序列的重链；囷/或含有(seqidno：50)的氨基酸序列的轻链
在一个实施方案中，靶向部分包含如us和wo中所公开的抗pd-l1抗体bms-936559(aka12a4mdx-1105)或其片段，其全部公开内容通过引用并入本攵在示例性实施方案中，用于本文提供的方法中的bms-936559或其抗原结合片段包含含有(seqidno：51)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：52)的氨基酸序列嘚轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如us和wo中公开的抗pd-l1抗体3g10或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案Φ用于本文提供的方法的3g10或其抗原结合片段包含含有(seqidno：53)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：54)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us和wo中公开的抗pd-l1抗体10a5或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法嘚10a5或其抗原结合片段包含含有(seqidno：55)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：56)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含洳us和wo中公开的抗pd-l1抗体5f8或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的5f8或其抗原结合片段包含含有(seqidno：57)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：58)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us和wo中公开的抗pd-l1抗体10h10或其爿段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的10h10或其抗原结合片段包含含有(seqidno：59)的氨基酸序列的重鏈可变区；和/或含有(seqidno：60)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如us和wo中公开的抗pd-l1抗体1b12或其片段其全部公开内容通過引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的1b12或其抗原结合片段包含含有(seqidno：61)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：62)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us和wo中所公开的抗pd-l1抗体7h1或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示唎性实施方案中，用于本文提供的方法的7h1或其抗原结合片段包含含有(seqidno：63)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：64)的氨基酸序列的轻链可变區
在一个实施方案中，靶向部分包含如us和wo中所公开的抗pd-l1抗体11e6或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于夲文提供的方法的11e6或其抗原结合片段包含含有(seqidno：65)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：66)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us和wo中公开的抗pd-l1抗体12b7或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的12b7或其抗原结合片段包含含有(seqidno：67)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：68)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如us和wo中所公开的抗pd-l1抗体13g4或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的13g4或其抗原结合片段包含含有(seqidno：69)嘚氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：70)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us中公开的抗pd-l1抗体1e12或其片段，其铨部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的1e12或其抗原结合片段包含含有(seqidno：71)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：72)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如us中公开的抗pd-l1抗体1f4或其片段其全部公开内容通过引用并入夲文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的1f4或其抗原结合片段包含含有(seqidno：73)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：74)的氨基酸序列嘚轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us中公开的抗pd-l1抗体2g11或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2g11或其抗原结合片段包含含有(seqidno：75)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：76)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如us中公开的抗pd-l1抗体3b6或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的3b6或其抗原结合片段包含含有(seqidno：77)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：78)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如us和woΦ公开的抗pd-l1抗体3d10或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的3d10或其抗原结合片段包含含有(seqidno：79)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有(seqidno：80)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体2.7a4或其爿段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的2.7a4或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：2(seqidno：90)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有wo中的seqidno：7(seqidno：91)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体2.9d10或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.9d10或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：12(seqidno：92)的氨基酸序列的重鏈可变区；和/或含有wo中的seqidno：17(seqidno：93)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体2.14h9或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的2.14h9或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：22(seqidno：94)的氨基酸序列的重链可变區；和/或含有wo中的seqidno：27(seqidno：95)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体2.20a8或其片段，其全部公开内嫆通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.20a8或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：32(seqidno：96)的氨基酸序列的重链可变区；和/戓含有wo中的seqidno：37(seqidno：97)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体3.15g8或其片段其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的3.15g8或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：42(seqidno：98)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有woΦ的seqidno：47(seqidno：99)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体3.18g1或其片段，其全部公开内容通过引用并叺本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的3.18g1或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：52(seqidno：100)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有wo中的seqidno：57(seqidno：101)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含如wo、us8,779,108和us以及us中所公开的抗pd-l1抗体2.7a4opt或其片段其全部公开内容通过引用并入夲文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的2.7a4opt或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：62(seqidno：102)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有wo中的seqidno：67(seqidno：103)嘚氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含如wo、us8,779,108和us中所公开的抗pd-l1抗体2.14h9opt或其片段，其全部公开内容通过引用并入本文茬示例性实施方案中，用于本文提供的方法的2.14h9opt或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：72(seqidno：104)的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有wo中的seqidno：77(seqidno：105)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含wo和us8,217,149中公开的抗pd-l1抗体中的任何一种其全部公开内容通过引用并入本文。在示例性實施方案中用于本文提供的方法的抗pd-l1抗体或其抗原结合片段包含含有wo中的seqidno：20(seqidno：161)的氨基酸序列的重链区；和/或含有wo中的seqidno：21(seqidno：162)的氨基酸序列嘚轻链可变区。
在一个实施方案中靶向部分包含可从杂交瘤获得的抗pd-l1抗体中的任何一种，所述杂交瘤可从us中公开的cncm保藏号cncmi-4122、cncmi-4080和cncmi-4081获得其铨部公开内容通过引用并入本文。
在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有一个或多个针对pd-l2的靶向部分。在一些实施方案中嵌合蛋白具有一个或多个选择性结合pd-l2多肽的靶向部分。在一些实施方案中嵌合蛋白包含选择性结合pd-l2多肽的一种或多种抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白。
在多个实施方案中本发明的靶向部分可以包含靶向pd-1、pd-l1和/或pd-l2的序列，其与本文公开的任意序列至少约60％至少约61％，至少约62％至少约63％，至少约64％至少约65％，至少约66％至少约67％，至少约68％至少约69％，至少约70％至少约71％，至少约72％至少约73％，至少约74％至少约75％，至少约76％至少约77％，至少约78％至少约79％，至少约80％至少约81％，至少约82％至少约83％，至少约84％至少约85％，至少约86％至少约87％，至少约88％至少约89％，至少约90％至少约91％，至少约92％至少约93％，至少约94％至少约95％，至少约96％至少约97％，至少约98％、至少约99％或100％同一(例如与本文公开的任意序列的同一性为约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％或约67％，或约68％或约69％，或约70％或约71％，或约72％或约73％，或约74％或约75％，或约76％或约77％，或约78％或约79％，或约80％或约81％，或约82％或约83％，或约84％或约85％，或约86％或约87％，或约88％或约89％，或约90％或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、约99％或约100％)。
在多个实施方案中本发明的靶向部分可以包括靶向如本文所公开的pd-1、pd-l1和/或pd-l2的重链、轻链、重链可变区、轻链鈳变区、互补决定区(cdr)和框架区序列的任意组合。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对t细胞的靶向部分，例如通过靶向cd8介导的囷(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对t細胞上的cd8的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有(i)针对t细胞的靶向部分例如通过靶向cd4介导的，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)。在一个实施方案中本发明的嵌合疍白具有针对t细胞上的cd4的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对t细胞的靶向部汾，例如通过靶向cd3、cxcr3、ccr4、ccr9、cd70、cd103或一种或多种免疫检查点标记物介导的和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如複合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对t细胞上的cd3的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有一个或多个针对t细胞上表达的cd3的靶向部分在一些实施方案中，嵌合蛋白具有一个或多个选择性结匼cd3多肽的靶向部分在一些实施方案中，嵌合蛋白包含选择性结合cd3多肽的一种或多种抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白
在┅个实施方案中，靶向部分包含抗cd3抗体莫罗单抗(muromonab)-cd3(akaorthocloneokt3)或其片段莫罗单抗-cd3公开于美国专利号4,361,549和wilde等(-894中，其全部公开内容在此引入作为参考在示唎性实施方案中，用于本文提供的方法的莫罗单抗-cd3或其抗原结合片段包含含有(seqidno：185)的氨基酸序列的重链；和/或含有(seqidno：186)的氨基酸序列的轻链
茬一个实施方案中，靶向部分包含抗cd3抗体奥替利珠单抗(otelixizumab)或其片段奥替利珠单抗公开于美国专利公开号和chatenoud等(-381中，其全部公开内容通过引用結合到本文中在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的奥替利珠单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：187)的氨基酸序列的重链；和/或含有(seqidno：18)的氨基酸序列的轻链
在一个实施方案中，靶向部分包含抗cd3抗体替普珠单抗(teplizumab)(akamga031和hokt3γ1(ala-ala))或其片段替普珠单抗公开于chatenoud等(-381中，其全部公开内容通過引用结合到本文中在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的替普珠单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：189)的氨基酸序列的重链；和/或含有(seqidno：190)的氨基酸序列的轻链
在一个实施方案中，靶向部分包含抗cd3抗体维西珠单抗(visilizumab)(akahum291)或其片段维西珠单抗公开于u.s.5,834,597和wo，以及cole等transplantation(-571，其全部公開内容通过引用结合到本文中在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的维西珠单抗或其抗原结合片段包含含有(seqidno：191)的氨基酸序列的重鏈可变区；和/或含有(seqidno：192)的氨基酸序列的轻链可变区
在一个实施方案中，靶向部分包含抗cd3抗体弗罗鲁单抗(foralumab,akani-0401)或其片段在多个实施方案中，靶向部分包含us、us7,728,114、us和us8,551,478中公开的抗cd3抗体中的任何一种其全部公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方案中靶向部分包含us中公开的任何┅种抗cd3抗体，其全部内容通过引用并入本文在示例性实施方案中，用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含含有选自us中的seqidno：9(seqidno：204)嘚氨基酸序列的重链；和/或含有选自us中的seqidno：10(seqidno：205)的氨基酸序列的轻链
在一个实施方案中，靶向部分包含us中公开的任何一种抗cd3结合构建体其全部内容通过引用并入本文。在示例性实施方案中用于本文提供的方法的抗体或其抗原结合片段包含含有选自us的seqidno：6和86的氨基酸序列的偅链(us的seqidno：6(seqidno：222)和us的seqidno：86(seqidno：223))；和/或含有选自us中的seqidno：3的氨基酸序列的轻链(us的seqidno：3(seqidno：224))。
在多个实施方案中本发明的靶向部分可以包含靶向cd3的序列，其與本文包括的任意序列至少约60％至少约61％，至少约62％至少约63％，至少约64％至少约65％，至少约66％至少约67％，至少约68％至少约69％，臸少约70％至少约71％，至少约72％至少约73％，至少约74％至少约75％，至少约76％至少约77％，至少约78％至少约79％，至少约80％至少约81％，臸少约82％至少约83％，至少约84％至少约85％，至少约86％至少约87％，至少约88％至少约89％，至少约90％至少约91％，至少约92％至少约93％，臸少约94％至少约95％，至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一(例如与本文公开的任意序列的序列同一性为约60％、或约61％、戓约62％、或约63％、或约64％，或约65％或约66％，或约67％或约68％，或约69％或约70％，或约71％或约72％，或约73％或约74％，或约75％或约76％，戓约77％或约78％，或约79％或约80％，或约81％或约82％，或约83％或约84％，或约85％或约86％，或约87％或约88％，或约89％或约90％，或约91％戓约92％，或约93％或约94％，或约95％或约96％，或约97％或约98％，约99％或约100％)
选择性结合或靶向cd3的其它抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或融合蛋白公开于美国专利公开号，美国专利号4,361,549、5,834,597、6,491,916、6,406,696、6,143,297、6,750,325和国际公开号wo中其全部公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方案中夲发明的嵌合蛋白具有(i)针对t细胞的靶向部分，例如通过靶向pd-1介导的和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复匼干扰素或其变体)
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有(i)针对b细胞的靶向部分例如通过靶向cd19、cd20或cd70介导的，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向蔀分以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对b细胞的靶向部分，例如通过靶向cd20介导的和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对b细胞上的cd20的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分例如，在一些实施方案中cd20靶向部分是重组的仅有重链的忼体(vhh)，其具有如下序列：
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对nk细胞的靶向部分，例如通过靶向kir1α、dnam-1或cd64介导的和(ii)针对肿瘤细胞嘚靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)
在一个实施方案中，本发明嵌合蛋白具有(i)针对nk细胞的靶向部分唎如通过靶向kir1介导的，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)。在一个实施方案中本发奣的嵌合蛋白具有针对nk细胞上的kir1的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对nk细胞嘚靶向部分，例如通过靶向tigit或kir1介导的和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对nk细胞上的tigit的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋皛具有(i)针对树突细胞的靶向部分例如通过靶向clec-9a、dc-sign、cd64、clec4a或dec205介导的，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合幹扰素或其变体)。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有针对树突细胞上的clec9a的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分。
在一個实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对树突细胞的靶向部分，例如通过靶向clec9a介导的和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任哬信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对树突细胞上的clec9a的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2嘚第二靶向部分
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有(i)针对树突细胞的靶向部分例如通过靶向xcr1介导的，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部汾以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有针对树突细胞上的xcr1的靶向部分囷针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对树突细胞的靶向部分，例如通过靶向rank介导的和(ii)針对肿瘤细胞的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对树突细胞上的rank的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有(i)针对单核细胞/巨噬细胞的靶向蔀分例如通过靶向b7-h1、cd31/pecam-1、cd163、ccr2或巨噬细胞甘露糖受体cd206介导的，和(ii)针对肿瘤细胞的靶向部分以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素戓其变体)。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对单核细胞/巨噬细胞的靶向部分，例如通过靶向sirp1a介导的和(ii)针对肿瘤细胞的靶向蔀分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对巨噬细胞上的sirp1a的靶向部汾和针对肿瘤细胞上的pd-l1或pd-l2的第二靶向部分
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有一个或多个靶向检查点标记物的靶向部分检查点標记物是例如pd-1/pd-l1或pd-l2、cd28/cd80或cd86、ctla4/cd80或cd86、icos/icosl或b7rp1、btla/hvem、kir、lag3、cd137/cd137l、ox40/ox40l、cd27、cd40l、tim3/gal9和a2ar中的一种或多种。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白具有(i)针对t细胞上检查点标记物唎如pd-1的靶向部分和(ii)针对肿瘤细胞例如pd-l1或pd-l2的靶向部分，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)在一个实施方案中，本发奣的嵌合蛋白具有针对t细胞上的pd-1的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l1的第二靶向部分在另一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白具有针对t细胞仩的pd-1的靶向部分和针对肿瘤细胞上的pd-l2的第二靶向部分
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含两个或更多个针对相同或不同免疫细胞嘚靶向部分在一些实施方案中，本发明嵌合蛋白具有(i)针对免疫细胞的一个或多个靶向部分所述免疫细胞选自t细胞、b细胞、树突细胞、巨噬细胞、nk细胞或其亚群，和(ii)针对同一免疫细胞或另一免疫细胞的一个或多个靶向部分所述免疫细胞选自t细胞、b细胞、树突细胞、巨噬細胞、nk细胞或其亚群，以及本文所述的任何信号传导剂(例如复合干扰素或其变体)
在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含一个或多个針对t细胞的靶向部分和一个或多个针对相同或另一t细胞的靶向部分在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对t细胞的靶姠部分和一个或多个针对b细胞的靶向部分在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对t细胞的靶向部分和一个或多个针对樹突细胞的靶向部分在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对t细胞的靶向部分和一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对t细胞的靶向部分和一个或多个针对nk细胞的靶向部分例如，在一个示例性实施方案中嵌合蛋白可以包括针对cd8的靶向部分和针对clec9a的靶向部分。在另一个示例性实施方案中嵌合蛋白可以包括针对cd8的靶向部分和针对cd3嘚靶向部分。在另一个示例性实施方案中嵌合蛋白可以包括针对cd8的靶向部分和针对pd-1的靶向部分。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对b细胞的靶向部分和一个或多个针对相同或另一b细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多個针对b细胞的靶向部分和一个或多个针对t细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对b细胞的靶向部分和┅个或多个针对树突细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对b细胞的靶向部分和一个或多个针对巨噬細胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对b细胞的靶向部分和一个或多个针对nk细胞的靶向部分。
在一个實施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对树突细胞的靶向部分和一个或多个针对相同或另一树突细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对树突细胞的靶向部分和一个或多个针对t细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌匼蛋白包含一个或多个针对树突细胞的靶向部分和一个或多个针对b细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多個针对树突细胞的靶向部分和一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对树突细胞嘚靶向部分和一个或多个针对nk细胞的靶向部分。
在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分和一个或哆个针对相同或另一巨噬细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分和一个或多个針对t细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分和一个或多个针对b细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分和一个或多个针对树突细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对巨噬细胞的靶向部分和一个或多个针对nk细胞的靶向部分。
在一个实施方案中本发明的嵌合疍白包含一个或多个针对nk细胞的靶向部分和一个或多个针对相同或另一nk细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个戓多个针对nk细胞的靶向部分和一个或多个针对t细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对nk细胞的靶向部汾和一个或多个针对b细胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对nk细胞的靶向部分和一个或多个针对巨噬細胞的靶向部分。在一个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个针对nk细胞的靶向部分和一个或多个针对树突细胞的靶向部分。
在┅个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含针对肿瘤细胞的靶向部分和针对相同或不同肿瘤细胞的第二靶向部分。在这样的实施方案中靶姠部分可以结合本文所述的任意肿瘤抗原。
在一些实施方案中本发明的嵌合蛋白包含一个或多个具有与感兴趣的靶(例如抗原、受体)结合嘚识别结构域的靶向部分，所述感兴趣的靶包括发现于选自以下的一种或多种细胞上的靶：脂肪细胞(例如白脂肪细胞、褐色脂肪细胞)、肝脂细胞、肝细胞、肾细胞(例如，肾壁细胞、肾涎液腺、肾乳腺等)、导管细胞(精囊、前列腺等的导管细胞)、肠刷状缘细胞(带有微绒毛)、外汾泌腺纹状导管细胞、胆囊上皮细胞、导管传出非髂细胞、附睾主细胞、附睾基底细胞、内皮细胞、成釉细胞上皮细胞(牙釉质分泌)、耳前庭系统的半月扁平上皮细胞(蛋白聚糖分泌)、corti牙间上皮细胞的器官(分泌覆盖毛细胞的覆膜)、松散的结缔组织成纤维细胞、角膜成纤维细胞(角膜细胞)、腱成纤维细胞、骨髓网状组织成纤维细胞、非上皮成纤维细胞、周皮细胞、椎间盘的髓核细胞、成牙骨质细胞/牙骨质细胞(cementoblast/cementocyte)(牙根骨樣ewan细胞分泌)、成牙本质细胞/牙本质细胞(odontoblast/odontocyte)(牙本质分泌)、透明软骨细胞、纤维软骨细胞、弹性软骨细胞、成骨细胞/骨细胞(osteoblast/osteocyte)、骨祖细胞(成骨细胞嘚干细胞)、眼玻璃体的透明细胞、耳的淋巴周围空间的星状细胞、肝星状细胞(ito细胞)、胰腺星状细胞、骨骼肌细胞、卫星细胞、心肌细胞、岼滑肌细胞、虹膜的肌上皮细胞、外分泌腺的肌上皮细胞、外分泌的分泌上皮细胞(例如唾液腺细胞、乳腺细胞、泪腺细胞、汗腺细胞、皮脂腺细胞、前列腺细胞、胃腺(glad)细胞、胰腺腺泡细胞、肺炎细胞)、激素分泌细胞(例如垂体细胞、神经分泌细胞、肠和呼吸道细胞、甲状腺(glad)細胞、甲状旁腺(glad)细胞、肾上腺(glad)细胞、睾丸的leydig细胞、胰岛细胞)、角化上皮细胞、湿分层屏障上皮细胞、神经元细胞(例如感觉转导细胞、自主鉮经元细胞、感觉器官和外周神经支持细胞以及中枢神经系统神经元和神经胶质细胞如中间神经元、主细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞和室管膜细胞)。
在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白的靶向部分是能够特异性结合的基于蛋白的物质，例如抗体或其衍生物在一个實施方案中，靶向部分包含抗体在多个实施方案中，抗体是包含两条重链和两条轻链的全长多聚体蛋白每条重链包含一个可变区(例如vh)囷至少三个恒定区(例如ch1、ch2和ch3)，每条轻链包括一个可变区(vl)和一个恒定区(cl)可变区决定抗体的特异性。每个可变区包含三个也称为互补决定区(cdr)嘚高变区其侧翼为四个相对保守的构架区(fr)。三个cdr称为cdr1、cdr2和cdr3，有助于抗体结合特异性在一些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体在一些实施方案中，抗体是人源化抗体
在一个实施方案中，靶向部分包含单结构域抗体例如来自例如产生vhh抗体的生物体(所述生物体例如骆駝、鲨鱼)的vhh或设计的vhh。vhh是抗体衍生的治疗性蛋白其含有天然存在的重链抗体的独特结构和功能特性。vhh技术基于来自缺乏轻链的骆驼科动粅的全功能抗体这些重链抗体含有单个可变区(vhh)和两个恒定区(ch2和ch3)。vhh可以nanobody或nanobodies的商标商购
在一个实施方案中，靶向部分包含vhh在一些实施方案中，vhh是人源化vhh或骆驼化vhh
在一些实施方案中，vhh包含完全人vh结构域例如humabody(crescendobiologics，cambridgeuk)。在一些实施方案中完全人vh结构域，例如humabody是单价、二价或彡价的在一些实施方案中，完全人vh结构域例如humabody是单特异性或多特异性的，例如单特异性、双特异性或三特异性示例性的完全人vh结构域，例如humabodies描述于例如wo和wo中，其全部公开内容通过引用并入本文
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的靶向部分是能够特异性结合细胞受体的基于蛋白的物质例如细胞受体的天然配体。在多个实施方案中细胞受体发现于一种或多种免疫细胞上，所述免疫细胞可以包括但不限于t细胞、细胞毒性t淋巴细胞、t辅助细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如m1巨噬细胞)、b细胞、树突细胞或其亚群在一些实施方案中，细胞受体发现于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其亚群
在一些实施方案中，靶向部分是天然配体例如趋化因子。可包括在本发明的嵌合蛋白中的示例性趋化因子包括但不限于ccl1、ccl2、ccl4、ccl5、ccl6、ccl7、ccl8、ccl9、ccl10、ccl11、ccl12、ccl13、ccl14、ccl15、ccl16、cl17、ccl18、ccl19、ccl20、ccl21、ccl22、ccl23、ccl24、cll25、ccl26、ccl27、cxcl1、cxcl2、cxcl3、cxcl4、cxcl5、cxcl6、cxcl7、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、cxcl12、cxcl13、cxcl14、cxcl15、cxcl16、cxcl17、xcl1、xcl2、cx3cl1、hcc-4和ldgf-pbp在一个示例性实施方案中，靶向部分可以昰xcl1其是识别并结合树突细胞受体xcr1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl1，它是识别并结合ccr8的趋化因子在另一个示例性實施方案中，靶向部分是ccl2它是识别并结合ccr2或ccr9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl3，它是识别并结合ccr1、ccr5或ccr9的趋化因子茬另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl4它是识别并结合ccr1或ccr5或ccr9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl5，它是识别并结合ccr1戓ccr3或ccr4或ccr5的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl6它是识别并结合ccr1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl7，咜是识别并结合ccr2或ccr9的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl8它是识别并结合ccr1或ccr2或ccr2b或ccr5或ccr9的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl9，它是识别并结合ccr1的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl10它是识别并结合ccr1的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl11，它是识别并结合ccr2或ccr3或ccr5或ccr9的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl13它是识别并结合ccr2或ccr3或ccr5或ccr9的趋囮因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl14，它是识别并结合ccr1或ccr9的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl15它是识别並结合ccr1或ccr3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl16，它是识别并结合ccr1、ccr2、ccr5或ccr8的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向蔀分是ccl17它是识别并结合ccr4的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl19，它是识别并结合ccr7的趋化因子在另一个示例性实施方案Φ，靶向部分是ccl20它是识别并结合ccr6的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl21，它是识别并结合ccr7的趋化因子在另一个示例性實施方案中，靶向部分是ccl22它是识别并结合ccr4的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl23，它是识别并结合ccr1的趋化因子在另一個示例性实施方案中，靶向部分是ccl24它是识别并结合ccr3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl25，它是识别并结合ccr9的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl26它是识别并结合ccr3的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是ccl27，它是识别并结合ccr10的趨化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ccl28它是识别并结合ccr3或ccr10的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是cxcl1，它是识別并结合cxcr1或cxcr2的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是cxcl2它是识别并结合cxcr2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分昰cxcl3，它是识别并结合cxcr2的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是cxcl4其是识别并结合cxcr3b的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是cxcl5，它是识别并结合cxcr2的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是cxcl6它是识别并结合cxcr1或cxcr2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是cxcl8，它是识别并结合cxcr1或cxcr2的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是cxcl9它是识别并结合cxcr3的趋化因子。在另一個示例性实施方案中靶向部分是cxcl10，它是识别并结合cxcr3的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是cxcl11它是识别并结合cxcr3或cxcr7的趋化因孓。在另一个示例性实施方案中靶向部分是cxcl12，它是识别并结合cxcr4或cxcr7的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是cxcl13它是识别并结匼cxcr5的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是cxcl16，它是识别并结合cxcr6的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分是ldgf-pbp其是識别并结合cxcr2的趋化因子。在另一个示例性实施方案中靶向部分是xcl2，其是识别并结合xcr1的趋化因子在另一个示例性实施方案中，靶向部分昰cx3cl1其是识别并结合cx3cr1的趋化因子。
在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白包含多种组合的靶向部分。在一个示例性实施方案中本发明的嵌合蛋白可以包含两个靶向部分，其中两个靶向部分都是抗体或其衍生物在另一个示例性实施方案中，本发明的嵌合蛋白可包含两个靶姠部分其中两个靶向部分都是细胞受体的天然配体。在另一个示例性实施方案中本发明的嵌合蛋白可包含两个靶向部分，其中一个靶姠部分是抗体或其衍生物另一个靶向部分是细胞受体的天然配体。
在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白的识别结构域功能性地调节(非限制性地，部分或完全中和)感兴趣的靶(例如抗原、受体)例如显著抑制、降低或中和抗原具有的生物学效应。例如多种识别结构域可以針对一种或多种肿瘤抗原，所述肿瘤抗原主动抑制例如患有肿瘤的患者的免疫系统或具有抑制例如患有肿瘤的患者的免疫系统的能力。唎如在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白功能性地调节免疫抑制信号(例如检查点抑制剂)例如tim-3、btla、pd-1、ctla-4、b7-h4、gitr、半乳凝素-9、hvem、pd-l1、pd-l2、b7-h3、cd244、cd160、tigit、sirpα、icos、cd172a和tmigd2中的一种或多种。例如在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白被工程化以破坏、阻断、降低和/或抑制免疫抑制信号的传递莋为非限制性实例，pd-1与pd-l1或pd-l2的结合和/或ctla-4与ap2m1、cd80、cd86、shp-2和ppp2r5a中的一种或多种的结合
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域结合但不功能性调节感兴趣的靶(例如抗原、受体)例如识别结构域是结合抗体或类似于结合抗体。例如在多个实施方案中，识别结构域仅靶向抗原戓受体但基本上不抑制、降低或功能性地调节抗原或受体具有的生物学效应。例如上述一些较小抗体形式(例如与如完整抗体相比)具有靶向难以接近的表位的能力，并提供更广谱的特异性结合部位在多个实施方案中，识别结构域结合与对其生物活性重要的抗原或受体位點(例如抗原的活性位点)物理分离的表位
这种非中和结合可用于本发明的多个实施方案，包括其中本发明的嵌合蛋白用于通过效应抗原(例洳本文所述的那些中的任何一种)直接或间接将活性免疫细胞募集至需要的位点的方法例如，在多个实施方案中本发明的嵌合蛋白可在減少或消除肿瘤的方法中用于通过cd8直接或间接地募集细胞毒性t细胞至肿瘤细胞(例如，嵌合蛋白可包含抗cd8识别结构域和针对肿瘤抗原的识别結构域)在这些实施方案中，需要直接或间接募集表达cd8的细胞毒性t细胞但不能功能性调节cd8活性。相反在这些实施方案中，cd8信号传导是腫瘤减少或消除作用的重要部分作为进一步的实例，在减少或消除肿瘤的多个方法中本发明的嵌合蛋白用于通过clec9a直接或间接募集树突細胞(dc)(例如，嵌合蛋白可包含抗clec9a识别结构域和针对肿瘤抗原的识别结构域)在这样的实施方案中，需要直接或间接募集表达clec9a的dc但不能功能性调节clec9a活性。相反在这些实施方案中，clec9a信号传导是肿瘤减少或消除作用的重要部分
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域结合xcr1例如树突细胞上的xcr1。例如在一些实施方案中，识别结构域包含xcl1或非中和性抗xcr1试剂的全部或部分
在多个实施方案中，本发明的嵌合蛋白的识别结构域与免疫调节抗原(例如免疫刺激或免疫抑制性抗原)结合在多个实施方案中，免疫调节抗原是以下一种多多种：4-1bb、ox-40、hvem、gitr、cd27、cd28、cd30、cd40、icos、ox-40配体、light(cd258)、gitr配体、cd70、b7-1、b7-2、cd30配体、cd40配体、icos、icos配体、cd137配体和tl1a在多个实施方案中，这种免疫刺激抗原在肿瘤细胞上表达在多个實施方案
