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删删『fff㈣㈣fJ|IfY1 删删『fff㈣㈣fJ|If Y1 80533 7” 华中农業大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 西 如需保密解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导師指导下进行的研究工作及取得的研究 成果.尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他入已 经发表或撰写过嘚研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料指导教师对此进行了审定.与我一同工作的同誌对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意 研究生签名:女德春 时间:山。口午歹月/日 籼椭签名』椭洺:◆ 签名日期:办c矿年歹月/日 签名日期:跏恼年,月 /日 注:请将本表直接装订住学位论文的扉页和目录之问 枳Pf.,(Z、尸卅7G哼,囷PtrOS2基因克隆及PtrCEI遗传转化研究目 枳Pf.,(Z、尸卅7G哼,和PtrOS2基因克隆及PtrCEI遗传转化研究 目 录 摘 要 .... .I ABSTRACT II 缩略词表 VI 第一章前言 课题的提出 ..1 2植物抗寒研究进展 。3 2.1植物受低温胁迫时的生理反应 3 2.1.1植物形态和解剖结构与抗寒性的关系 3 2.1.2植物细胞膜结构与抗寒性的关系 3 2.1.3植物保护酶系统与抗寒性的关系 5 2.1.4渗透调节物质与植物抗寒性的关系 5 2.2植物响应低温胁迫的分子机理 7 2.2.1不依赖ABA的低温响应基因表达调控途径 7 2.2.1.1ICE-CBF/DREBI调节单元 。8 2.2.1.1.1 CBF/DREB转录因子 一8 2.2.1.1.2 ICEI转录因子 O 2.2.1.1.3 ICEI蛋白的修饰和调控 12 2.2.1.1.4 ICEI-CBF/DREB|调节元的抑制因子 .14 2.2.1.2非ICE.CBF/DREB调节元的低温响应基因 14 2.2.2依赖ABA的低温响应基因表达调控途径 15 2.3植物的抗寒基因工程研究进展 .17 2.3.1低温响应基因的遗传转化 17 2.3.2植物抗冻蛋白的遗传转化 。18 2.3.3氧化胁迫相关基因的遗传转化 18 2.3.4脂肪酸去饱和酶基因的遗传转化 ..19 3本研究的目的和意义 19 第二章枳PtrCE基因的克隆、表达及功能分析 2 材料与方法 ..2 1.1试验材料 。2 1.2菌株与质粒载体 22 1.3酶与试剂盒 ..22 1.4引物合成 ..22 2实验方法 。23 2.1试验材料嘚准备 一23 2.2枳PtrCEJ『基因克隆 ..23 2.2.I植物总RNA的抽提 .23 2.2.2 RNA质量检测与浓度测定 .24 2.2.3第一链cDNA合成 24 2.2.4 PCR扩增获得P纠CEJ基因片段 24 2.2.5 PCR产物的同收、純化 25 2.2.6同收纯化的目的片段与克隆载体的连接 ..26 2.2.7大肠杆菌感受态的制备 26 2.2.8连接产物的转化及重组质粒的蓝白斑筛选 ..26 2.2.9屍,!,CE基因片段测序 27 2.2.1 0 3’RACE 。27 2.2.1序列拼j!融..:.: 28 2.2.12完整的ORF克隆 28 华中农业大学2010届博士学位论文2.3生物信息学分析 华中农业大学2010屆博士学位论文 2.3生物信息学分析 一29 2.4 PtrCE基因在不同的逆境下的表达模式分析 29 2.5枳PtrCE』基因超表达载体构建 ..30 2.5.1小量法提取质粒DNA .30 2.5.2超量表达载体的构建 30 2.6根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 一32 2.6.1根癌农杆菌感受态的制备(CaC2法) 32 2.6.2工程菌的制备 33 2.6.3试剂和培养基配制 33 2.6.4根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草 33 2.7转基因烟草Km抗性植株PCR检测 34 2.7.1转基因烟草基因组DNA提取 .34 2.7.2转基因烟草PCR检测 .35 2.7.3转基因烟草半定量PCR检測 .35 2.8 T代转基因和野生型烟草的获得和筛选 。35 2.9冷处理后T代转基因和野生型烟草存活率的测定 35 2.10冷处理后T代转基因和野生型烟草表型观测 ┅36 2.1相对电导率的测定 .36

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估计┅后怕不是再签约出伊欧娜还有跟高校舰队的联动怕不是要出127单装晴风

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