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即送15丁当
【求助】miRNA的 northern blot时关于转膜电压的问题
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这个帖子发布于10年零250天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
在几乎所有miRNA northern blot 的protocol都提到转膜时，在恒流情况下，电压应该是越来越高的，可不知为什么，我这个一直是越来越低。转膜液是0.5*TBE。我一直也没做出来，但是这一步也找不到什么问题。请教各位大侠。谢谢了！：）
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恳请哪位大侠帮忙分析一下？
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都做到notthern了，真是高级啊，老外鉴定miRNA都是做notthern的，有什么经验分享呀
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byron2000zhou 都做到notthern了，真是高级啊，老外鉴定miRNA都是做notthern的，有什么经验分享呀这个，我上来就先做的northern，想先建立一个检测miRNA的系统，然后才可以往下做啊。我是这样觉得，不知你是先做什么？
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为什么不用基因芯片分析？基因芯片是高通量的检测方法。
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先做了芯片，但只做了一对，所以结果只能作为参考，还需要northern验证。而且芯片是公司做的，所以我把northern看作试验的开始。但作了两个月了，还没有出来结果。：（
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做taqman的real－time PCR吧，钱充足的话这个方法简单的多！
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yayatian 你好，你做的miRNA芯片是让公司给做的么？让公司给做的话所有花费大约是多少啊
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我觉得northern这个东西要用到放射性同位素标记，对身体有害，最后再说把，要是非要这个就做一把。觉得real time pcr还是不错的
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能不能分享大家的northern 的protocol 啊？？
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northern的protocol在网上都查得到的，有很多种，你选一种与自己实验室的资源和背景最相似的就可以了。
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我用northern做过miRNA内参检测，用生物素标记探针，上样4ug总RNA检测U6时，信号强度肉眼就能看到，而且背景很干净，不过还没有进行具体miRNA的检测，不知道miRNA的表达水平会怎么样。至于转膜，我通常都是200mA恒流转30～40min。转完膜后你可以用亚甲兰对膜染色5～10min，再用水漂洗干净，看上面有没有条带。亚甲兰的配方在分子克隆第二和第三版均有 ，在介绍northern转膜的相关章节。另外问下，你的探针是用什么标记的，同位素还是地高辛或生物素？
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fangk1974 edited on
还是用同位素灵敏点，也准确；real time pcr存在的问题是有时区分不开前体和成体
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半干转膜仪转膜时常遇到的问题是很容易短路，且容易发热，不知各位有没有好的方法
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关于丁香园关注今日：16 | 主题：307385
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即送15丁当
请教有关northern blot转膜的问题？？？
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这个帖子发布于13年零175天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好，本人第一次做northern blot，不知将总RNA转膜和mRNA转膜有什么区别，是否后者更佳，为什么？怎样选择？希望不吝赐教．谢谢．再者目前我没有看到过mRNA纯化后的电泳图，麻烦谁有上好的给我传一张．以便对比，来判定自己的电泳图是否良好．再次致谢．我的E-mail:
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第一：mRNA容易降解，如果你获得的量不多，而电泳环境又不好，那么普通的电泳是看不到mRNA的。第二：提取mRNA的试剂盒比提总RNA的试剂盒要贵的多。第三：转膜前检测一下RNA的含量和纯度就可以了。第四：随便找一本catolog，里面都有mRNA的图。
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恕在下无知catolog是什么书？另外您所说的前三点我都明白。我是想问，总RNA转膜和mRNA转膜对于最后的杂交结果的影响有什么区别？是不是后者更具优越性，怎样的优越性？
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转膜没什么区别，条件都一样。事情是这样的，每条 LANE 上的RNA总量是一定的，如果要测的目的 mRNA 丰度低，总希望能多上点样，所以就用 mRNA了。理论上讲杂交效率是一样的，注意做 NORTHERN，在处理上样样品时，不要先加 EB，那样 EB和 RNA结合太紧了，会降低继续与探针杂交的效率。
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关于丁香园blot知识大全,blot—生物秀
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